Atšķirība starp sākotnējo un reverso grunti

Galvenā atšķirība - uz priekšu pret reverso grunti
 

Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir DNS amplifikācijas metode, ko izmanto molekulārajā bioloģijā. Tas ir parasti izmantots paņēmiens, kas rada miljoniem līdz miljardiem kopiju īpaši ieinteresētai DNS sekvencei. Tas ir in vitro laboratorijās veiktā metode. PCR paņēmiens ir pilnībā atkarīgs no komerciāli ražotas DNS polimerāzes, ko sauc par Taq polimerāzi. Un arī tam nepieciešami vairāki citi komponenti un pareiza temperatūras uzturēšana. Viena svarīga sastāvdaļa ir grunti. Praimeri ir īsas DNS sekvences, kas īpaši izstrādātas mērķa DNS sekvencei. Parasti to garums ir ap 20 nukleotīdu. Taq polimerāze katalizē nukleotīdu pievienošanu pastāvošajā nukleotīdu secībā. Tādējādi grunti tiek izmantoti kā jaunu šķiedru sintēzes sākumpunkti. Taq polimerāze darbojas tikai 5 'līdz 3' virzienā, līdz ar to DNS sintēze notiek tajā pašā 5 'līdz 3' virzienā. Tā kā DNS ir divpavediena, PCR ir nepieciešami divu veidu praimeri. Tie ir pazīstami kā priekšējie grunti un reversie grunti. Uz priekšu un atpakaļgaitas praimeri tiek apzīmēti, pamatojoties uz grunts pagarinājumu virzienu DNS, kad notiek DNS sintēze. Uz priekšu grunts atkvēlina ar antisense DNS virkni un sāk gēna + ve virknes sintēzi 5 'līdz 3' virzienā. Reversais gruntējums atkvēlina ar sensenu virkni un uzsāk kodējošās virknes komplementārās virknes sintēzi; kas ir -gēna gredzena virziens 5'to 3 'virzienā. Tas ir galvenā atšķirība starp priekšējo un atpakaļgaitas grunti.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir Forward Primer
3. Kas ir reversais gruntējums
4. Līdzības starp Forward un Reverse Primer
5. Salīdzinājums blakus - pamatne uz priekšu un atpakaļgaitu tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir Forward Primer?

Orientācija uz priekšu ir gēna kodējošās vai jutās virknes sintēze. Taq polimerāze katalizē jaunas virknes sintēzi 5 'līdz 3' virzienā. Kodējošās virknes sintēze notiek tad, kad gruntējums rūdās ar nekodējošo vai antisense virkni un pagarinās 5 'līdz 3' virzienā.

01. attēls. Priekšējie un atpakaļgaitas grunti

Grunts, kas apdedzinās ar antisense virkni vai nekodējošo virkni, vai matricas virkni, ir pazīstams kā priekšējais gruntējums, jo priekšējais gruntējums darbojas kā sākuma punkts gēna kodēšanas vai pozitīvās virknes sintēzei. Uz priekšu esošajam gruntim ir īsa nukleotīdu secība, kas papildina antisense virknes 3 'sānu galu. Tas hibridizējas ar antisense virkni un atvieglo Taq polimerāzi, lai pievienotu nukleotīdus, kas papildina šablona virkni.

Kas ir reversais gruntējums?

Reversais gruntējums ir īsa DNS secība, kas rūpējas ar sensora vai kodējošās virknes 3'-galu. Reversais gruntējums kalpo par sākumpunktu kodējošās secības vai nekodēšanas secības komplementa sintezēšanai. Reversais gruntējums ir veidots kā papildinājums kodēšanas virknes 3 'galam. Tādējādi tas rūdās ar kodējošās virknes 3 'galu un ļauj Taq polimerāzei sintezēt antisense virkni vai matricas virkni. Tā kā tā orientācija ir apgriezta, šis gruntējums tiek marķēts kā apgriezts gruntējums.

Gan reversie, gan priekšējie grunti ir svarīgi, lai saražotu miljoniem līdz miljardiem kopiju no noteiktiem DNS reģioniem, kuri ir mērķēti vai ieinteresēti.

Kādas ir līdzības starp priekšējo un reverso grunti?

• Gan priekšējie, gan reversie grunti ir izgatavoti no oligonukleotīdiem.
• Gan priekšējam, gan reversajam primerim ir īsa nukleotīdu secība, kas papildina DNS dubultā virziena blakus esošos galus.
• Gan priekšējie, gan reversie grunti parasti sastāv no 20 nukleotīdiem.
• Polimerāzes ķēdes reakcijās tiek izmantoti gan priekšējie, gan reversie grunti.
• Gan Forward, gan Reverse grunti tiek sintezēti komerciāli.
• Gan uz priekšu, gan uz atpakaļgaitas praimeri ir stabili temperatūrā, un tiem parasti ir līdzīga Tm.
• Gan priekšējie, gan reversie grunti tiek atkvēlināti ar mērķa DNS sekvencēm.
• Gan priekšējie, gan atpakaļgaitas grunti ir konstruēti atbilstoši PCR reakcijām.
• Gan priekšējie, gan atpakaļgaitas grunti tiek kalpoti par DNS amplifikācijas sākumpunktu.
• Gan reversie, gan priekšējie grunti ir svarīgi, lai izgatavotu mērķētu vai ieinteresētu DNS sekvenču noteiktu reģionu miljonu eksemplāru.

Kāda ir atšķirība starp priekšējo un reverso grunti?

Forward Primer vs Reverse Primer
Forward primer ir īsa DNS sekvence, kas hibridizējas ar nekodētā 3 g gala vai gēna matricas virkni un kalpo par sākumpunktu kodējošās secības sintezēšanai.	Reversais gruntējums ir īsa DNS sekvence, kas hibridizējas ar kodēšanas 3 'galu vai beztemplātu virkni un kalpo par sākumpunktu nekodējošās secības sintezēšanai.
Rūdīšanas dzīsla
Uz priekšu grunts griezumi ar šablona šķipsnu.	Gruntēta apgrieztā gruntēšana ar virkni bez šablona.
Rezultātā jauna secība
Forward primer atvieglo kodēšanas secības sintēzi.	Reversais gruntējums atvieglo nekodējošās secības sintēzi.

Kopsavilkums - uz priekšu pret reverso grunti

PCR tehnikā ir iesaistīti divu veidu grunti. Tie ir sākotnējie un reversie grunti. Balstoties uz gruntējuma pagarinājumu jaunu DNS šķiedru sintēzē, šie grunti tiek marķēti vai nosaukti. Taq polimerāze sintezē jauno DNS ar orientāciju no 5 'līdz 3'. Līdz ar to grunti ir veidoti kā papildinājumi divkāršo šķiedru 3 'galiem. Priekšējais gruntējums, kas pagarinās 5 'līdz 3' virzienā, hibridizējas ar antisenses 3 'galu vai šablonu vai nekodējošo secību. Tas kalpo kā sākumpunkts kodēšanas secības sintezēšanai. Apgrieztais gruntējums, kas pagarinās 5 'līdz 3' virzienā, hibridizējas ar kodēšanas 3 'galu vai beztemplātu, vai senseno virkni. Tas kalpo kā sākumpunkts kodēšanas secības sintezēšanai. Šī ir atšķirība starp sākotnējo un reverso grunti.

Atsauce:

1. “Primer (molekulārā bioloģija).” Wikipedia, Wikimedia Foundation, 2018. gada 20. februāris. Pieejams šeit 
2. “Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR).” Hanas akadēmija. Pieejams šeit 

Attēla pieklājība:

1.'Primers RevComp Melted2'By Richard Wheeler (Zephyris) - Savs darbs, (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia