Atšķirība starp imunofluorescenci un imūnhistoķīmiju

Galvenā atšķirība - imunofluorescence pret imūnhistoķīmiju
 

Slimību diagnostika, kurā tiek izmantotas molekulāri bioloģiskās metodes, ir kļuvusi par jaunu klīnisko laboratoriju tehnoloģiju jomu. Tas ietver visus testus un metodes slimības identificēšanai un slimības cēloņa izpratnei, analizējot DNS, RNS vai ekspresētos proteīnus organismā. Straujie sasniegumi molekulārajā diagnostikā ļāva veikt pamatpētījumus par lipīgajām un neinfekciozajām slimībām. Tos izmanto, lai noteiktu secības vai ekspresijas līmeņa izmaiņas svarīgos gēnos vai olbaltumvielās, kuras ir saistītas ar slimību. Imūnfluorescence (IF) un imūnhistoķīmija (IHC) ir divas tik plaši izmantotas metodes vēža bioloģijā. IF ir IHC tips, kurā monoklonālo un poliklonālo antivielu analīzē izmanto fluorescences noteikšanas metodi, turpretī IHC izmanto ķīmiskas metodes monoklonālo un poliklonālo antivielu noteikšanai. Šī ir galvenā atšķirība starp IF un IHC.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir imunofluorescence 
3. Kas ir imūnhistoķīmija
4. Imūnfluorescences un imūnhistoķīmijas līdzības
5. Salīdzinājums blakus - imūnfluorescence un imūnhistoķīmija tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir imūnfluorescence (IF)?

Imunofluorescence ir noteikšanas paņēmiens, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, izmantojot noteikšanas mērķus - fluorescējošas krāsvielas vai fluorescējošas olbaltumvielas. Marķētās sekundārās antivielas var izraisīt nevēlamus fona signālus; tāpēc IF metodes pamatā ir pašas primārās antivielas marķēšana, lai atklāšanas laikā izvairītos no nevēlamiem signāliem. Izmantojot šo paņēmienu, tiek novērsta nespecifiska saistīšanās starp primāro un sekundāro antivielu, un tas notiek ātrāk, jo nav iesaistīts sekundārais inkubācijas posms. Tiek uzlabota arī datu kvalitāte.

01. attēls. Divkārša imūnfluorescences iekrāsošana BrdU, NeuN un GFAP

Fluorhromi vai fluorescējošas krāsvielas ir savienojumi, kas var absorbēt starojumu, vēlams ultravioletais starojums, kas ir satraukts. Kad daļiņas no ierosinātā stāvokļa sasniedz pamata stāvokli, tās izstaro starojumu, ko uztver un uztver detektors, veidojot spektru. Ir ļoti svarīgi, lai dienasgaismas marķējums būtu saderīgs un stabils konkrētajai reakcijai, un tas būtu pareizi konjugēts ar antivielu, lai iegūtu precīzus rezultātus. Viens no visbiežāk izmantotajiem fluorhromiem ir fluoresceīna izotiocianāts (FITC), kas ir zaļā krāsā, ar absorbcijas un emisijas maksimālo viļņu garumu attiecīgi 490 nm un 520 nm. Rodamīns, cits aģents, ko izmanto IF, ir sarkanā krāsā un ar izteiktu absorbcijas un emisijas maksimālo viļņu garumu 553 nm un 627 nm..

Kas ir imūnhistoķīmija (IHC)?

IHC ir molekulārā testēšanas metode, ko praktizē, lai identificētu un apstiprinātu antigēna klātbūtni mērķa šūnā. Mērķa šūna varētu būt infekcijas daļiņa, mikrobu patogēns vai ļaundabīga audzēja šūna. IHC izmanto monoklonālās un poliklonālās antivielas, lai noteiktu antigēnu klātbūtni mērķa šūnu virsmas virsmā. Šīs tehnikas pamatā ir antigēna un antivielu saistīšana. Ar šīm antivielām tiek konjugēts noteikšanas marķieris, lai noteiktu konkrētā antigēna klātbūtni vai neesamību. Šie marķieri var būt ķīmiski marķieri, piemēram, fermenti, ar fluorescējoši marķētām antivielām vai ar radioaktīvi iezīmētas antivielas.

02 attēls: Peles un smadzeņu šķēle, kas iekrāsota ar imūnhistoķīmiju

Vispopulārākais IHC pielietojums ir vēža šūnu bioloģijā, lai identificētu ļaundabīgu audzēju klātbūtni, bet to izmanto arī infekcijas slimību noteikšanai.

Kādas ir imunofluorescences un imūnhistoķīmijas līdzības?

• Imūnfluorescence un imūnhistoķīmija notiek in vitro apstākļos.
• Abas metodes ir balstītas uz antigēna antivielu
• Abas ir ļoti ātras tehnikas.
• Metožu rezultāti ir reproducējami.
• Abiem ir uzlabota datu kvalitāte.
• Šīs metodes izmanto vēža un infekcijas slimību diagnostikā.

Kāda ir atšķirība starp imunofluorescenci un imūnhistoķīmiju?

Imūnfluorescence un imūnhistoķīmija
IF ir noteikšanas paņēmiens, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, izmantojot noteikšanai fluorescējošas krāsvielas vai fluorescējošas olbaltumvielas.	IHC ir noteikšanas metode, kurā testā izmantotās antivielas tiek marķētas, izmantojot detektēšanai ķīmiskas vielas vai radioaktīvus elementus.
Precizitāte
IF tehnikā precizitāte ir augstāka nekā IHC.	Precizitāte ir zemāka IHC.
Specifiskums
IF ir konkrētāks.	IHC nav tik specifisks.

Kopsavilkums - imunofluorescence un imūnhistoķīmija

Molekulārie mehānismi ir izraisījuši daudzas izmaiņas medicīnas jomā, radot uzlabotas molekulārās testēšanas metodes, kas diagnostikas jomā ir izraisījušas revolūcijas. Šie izgudrojumi ļāva ātri un precīzi identificēt un apstiprināt slimību, tādējādi nodrošinot sekmīgu zāļu ievadīšanu un ražošanu. Šīs metodes izmanto arī farmakoloģijā, lai atrastu zāļu mērķus un apstiprinātu zāļu farmakokinētiskās īpašības zāļu metabolisma laikā. IF un IHC ir divas diagnostikas metodes, kuru pamatā ir antigēna un antivielu saistīšanas jēdziens, lai gan noteikšanas veids abās metodēs atšķiras. IF antigēna noteikšanai izmanto fluorescences principu, un IHC antigēna noteikšanai izmanto ķīmiskās konjugācijas jēdzienu. Šī ir atšķirība starp IF un IHC.

Lejupielādējiet imunofluorescences un imūnhistoķīmijas PDF versiju

Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts citēšanas piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet PDF versiju šeit. Imūnfluorescences un imūnhistoķīmijas atšķirības.

Atsauces:

1. Aoki, Valéria, et al. “Tieša un netieša imunofluorescence.” Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, pieejams šeit. Piekļuve 2017. gada 25. augustam.
2. Duraiyan, Jeyapradha, et al. “Imunohistoķīmijas pielietojumi.” Journal of Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2012. gada augusts, pieejams šeit. Piekļuve 2017. gada 25. augustam.

Attēla pieklājība:

1. “Divkārša imūnfluorescences krāsošana BrdU, NeuN un GFAP”. Autori: Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Transformējošā augšanas faktora intranazāla ievadīšana- beta1 pelēm pēc insulta samazina infarkta tilpumu un palielina neiroģenēzi subventrikulārajā zonā; PMID 19077183 (CC BY 2.0), izmantojot Commons Wikimedia
2. “Peles audu hipotalāms, kas iekrāsots ar ABC imūnhistoķīmiju”. Autors: zabbn - pašu darbs (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia