Atšķirība starp fūziju un Taq polimerāzi

Galvenā atšķirība - Phusion vs Taq Polimerāze
 

DNS polimerāzes ir plaši izmantotas enzīmi molekulārās bioloģijas metodēs, un tās dabiski atrodas arī visos organismos, kuriem notiek DNS replikācija. Tie ir galvenie polimerizējošie enzīmi, kas iesaistās replikācijas laikā. DNS polimerāze ir spējīga pievienot nukleotīdus DNS virknes brīvajam 3 'galam, tādējādi izraisot jaunas virknes paplašināšanos. Pašlaik, ņemot vērā molekulārās bioloģijas attīstību slimību diagnostikā un rūpniecībā, ir svarīgi ražot polimerāzes, kurām ir dažādas derīgās īpašības. Tas palielina metodes precizitāti un padara to ātrāku. Phusion un Taq polimerāze ir divi komerciāli ražoti termostabili polimerāzes fermenti, kurus izmanto īpašos molekulāros lietojumos. Phusion ir DNS polimerāze, kas izolēta no Pyrococcus furiosus un galvenokārt tiek izmantots klonēšanas eksperimentos, lai palielinātu ticamību. Taq DNS polimerāze ir standarta DNS polimerāze, ko izmanto polimerāzes ķēdes reakcijā (PCR), un to izdala no termostabilas baktērijas; Thermus aquaticus. galvenā atšķirība starp diviem fermentiem ir mikroorganismu avots. Phusion ir izolēts no ekstremofila, Pyrococcus furiosus tā kā Taq polimerāze ir izolēta no termofila, Thermus aquaticus.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir fūzija
3. Kas ir Taq polimerāze
4. Phusion un Taq polimerāzes līdzības
5. Salīdzinājums blakus - Phusion vs Taq polimerāze tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir Phusion?

Kodolsintēzes DNS polimerāze ir jauna polimerāze, kuru ražo, izdalot fermentu no Pyrococcus furiosus, kas ir ekstremofīls Archaea. Šie mikrobi atrodas ārkārtīgi augstas temperatūras apstākļos, tādējādi padarot polimerāzi par ļoti karstumizturīgu polimerāzi. Kodolsintēzes polimerāzi izmanto, lai iegūtu ārkārtīgu precizitāti salīdzinājumā ar parasto termostabilo polimerāzi; Taq polimerāze. Kodolsintēzes polimerāze spēj amplificēt garās šablonus līdz 7,5 kb genoma DNS. Phusion polimerāzes optimālā polimerizācijas spēja ir 72⁰ C. Fūzija tiek izmantota arī klonēšanas produktos sekvencēšanai, ekspresijas analīzei un mutāciju analīzei.

Kodolsintēzes DNS polimerāzei ir 3 '- 5' eksonukleāzes aktivitāte. Tas ļauj koriģēt tikko sintezēto virzienu pēc sintēzes. Tādējādi nukleotīdu neatbilstības ir viegli labojamas. Tādējādi tam ir mazāks kļūdu līmenis. Phusion polimerāzes vispārējās priekšrocības ir;

• Ārkārtīga uzticība
• Liels ātrums un samazināts pagarināšanas laiks
• Izturīgas reakcijas un prasa minimālu optimizāciju
• Augsta raža

01. attēls. Fūzija

Phusion polimerāzes galvenais trūkums ir tas, ka tā tiek kavēta deoksiuridīna trifosfāta (dUTP) klātbūtnē. Kad dUTP tiek uzkrāti reakcijas maisījumā, tas var kavēt fūzijas polimerāzes darbību. To novērš, pirms fermenta pievienošanas reakcijas maisījumu apstrādājot ar dUTPase. Pašlaik kā kodolsintēzes polimerāzes vietā tiek izmantots pret dUTP izturīgs Phusion polimerāzes variants, kas pazīstams kā Pfu Turbo.

Kas ir Taq polimerāze?

Taq DNS polimerāze izgudrojums ir radījis revolūciju molekulārās bioloģijas jomā. Tas atrisināja galveno DNS amplifikācijas problēmu. Taq DNS polimerāze ir termiski stabils polimerāzes enzīms, kas ekstrahēts un izolēts no termofīlās baktērijas, Thermus aquaticus. Šo fermentu atklāšana noved pie PCR attīstības. Šis enzīms ļāva izmantot DNS amplifikācijā polimerāzes ķēdes reakciju, nevis parasto darbietilpīgo klonēšanas paņēmienu vietā. Tagad PCR izmanto molekulārajā diagnostikā, lauksaimniecības un rūpniecības jomā, un šai metodei ir pievienotas daudzas jaunas variācijas.

02 attēls: Taq polimerāze

Taq DNS polimerāze darbojas optimālā temperatūras diapazonā starp 72 ° C⁰C - 80⁰C. Taq DNS polimerāzei ir nepieciešams koeficients; magnijs tā funkcijai. Taq polimerāzei nav 3 '- 5' korektūras spējas, tāpēc Taq DNS polimerāzes kļūdu līmenis ir augsts salīdzinājumā ar jaunākiem DNS polimerāžu veidiem, piemēram, fūzijas polimerāzi utt., Bet Taq DNS polimerāzes popularitāte joprojām ir Fermenta ērtības un elastības dēļ tas ir vienāds visā zinātnes pasaulē.

Kādas ir Phusion un Taq polimerāzes līdzības??

• Gan Phusion, gan Taq polimerāzes enzīmi ir polimerizējoši fermenti, kas spēj pievienot nukleotīdus DNS virknes 3 'brīvajam galam.
• Gan Phusion, gan Taq polimerāzēm ir nepieciešama gruntēšanas secība, lai sāktu polimerizāciju.
• Gan Phusion, gan Taq polimerāzes ir karstumizturīgas.
• Gan Phusion, gan Taq polimerāzes tiek izmantotas PCR mehānismos, lai pastiprinātu DNS.
• Pievienojot polimerāzi reakcijas maisījumam, tiek pievienotas gan Phusion, gan Taq polimerāzes, lai nodrošinātu fermenta efektivitāti.
• Gan Phusion, gan Taq polimerāzes tiek komerciāli sintezētas eksperimentāliem molekulārās bioloģijas mērķiem.
• Gan Phusion, gan Taq polimerāzēm ir nepieciešams kofaktors, lai tā darbotos.

Kāda ir atšķirība starp fūziju un Taq polimerāzi?

Phusion vs Taq polimerāze
Phusion ir DNS polimerāze, kas izolēta no Pyrococcus furiosus un galvenokārt tiek izmantots klonēšanas eksperimentos, lai palielinātu ticamību.	Taq DNS polimerāze ir standarta DNS polimerāze, ko izmanto polimerāzes ķēdes reakcijā (PCR), un to izdala no termostabilas baktērijas, Thermus aquaticus.
Avots Organisms
Phusion tiek iegūta no ekstremofīlijas archaea - Pyrococcus furiosus.	Šie literārie darbi ilgst no kolonizācijas perioda līdz dekolonizācijas periodam.
Pārbaudes spēja
Phusion ir 3—5 'lasāmprasme.	Taq polimerāzes trūkst 3 '- 5' lasāmprasmes.
Uzticība
Ar Phusion ir liela uzticība.	Taq polimerāzei ir zema precizitāte.
Pastiprināšana
Phusion spēj pastiprināt garus DNS fragmentus.	Taq polimerāze spēj pastiprināt daudz īsākus DNS fragmentus.
saindēšanās ar dUTP
Kodolsintēzes darbību kavē uzkrāšanās nepāra.	Taq polimerāzi neinhibē dUPT.

Kopsavilkums - Phusion vs Taq polimerāze

Fūzijas un Taq DNS polimerāzes ir divas karstumizturīgas polimerāzes, kuras izmanto PCR metodēs. Phusion ir polimerāze, kas izolēta no ekstremofila, Pyrococcus furiosus tā kā Taq ir izolēts no termostabilām baktērijām Thermus aquaticus. Taq DNS polimerāzes atklāšana noved pie PCR izgudrojuma. Phusion ir daudz priekšrocību salīdzinājumā ar Taq, kas ir padarījusi Phusion par labāku variantu augstas precizitātes DNS ražošanā. Tomēr Taq polimerāzi joprojām izmanto kā standarta polimerāzes enzīmu PCR. Šī ir atšķirība starp Phusion un Taq polimerāzi.

Atsauce:

1.Biolabs, Jaunanglija. “Taq DNS polimerāzes.” Jaunanglijas biolabs: reaģenti dzīvības zinātņu nozarei. Pieejams šeit  
2. “Kodolsintēzes DNS polimerāze.” Jaunanglijas biolabi. Pieejams šeit 

Attēla pieklājība:

1.'GAM ilustrējis Nivin Nasri'By NivinN - Savs darbs, (CC BY-SA 4.0), izmantojot Commons Wikimedia  
2.'Taq'By Adenosine - Savs darbs, (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia