Starpība starp RP HPLC un HIC

galvenā atšķirība starp RP HPLC un HIC ir tas RP HPLC izmanto vairāk polāro mobilo fāzi un mazāk polāro stacionāro fāzi. Tā kā HIC izmanto hidrofobisku stacionāru fāzi, kas ļauj hidrofobām molekulām piestiprināties tai.

Hromatogrāfija ir analītiska metode, kas palīdz sadalīt maisījumu tā sastāvdaļās. Pirmkārt, mums ir jāizšķīdina atdalāmais paraugs šķīdumā. Šo šķīduma un vielas maisījumu sauc par kustīgo fāzi. Tad mobilā fāze tiek izvadīta caur citu materiālu, ko sauc par stacionāro fāzi. Stacionārā fāze nosaka sastāvdaļu atdalīšanu. Atdalīšana notiek materiāla sadalīšanās dēļ starp kustīgo un stacionāro fāzi.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir RP HPLC
3. Kas ir HIC?
4. Salīdzinājums blakus - RP HPLC salīdzinājumā ar HIC tabulas formā
5. Kopsavilkums

Kas ir RP HPLC?

Termins RP HPLC nozīmē Augstas veiktspējas apgrieztā fāzes šķidruma hromatogrāfija. Tas ietver sastāvdaļu atdalīšanu maisījumā atbilstoši hidrofobitātei. Hidrofobie komponenti kustīgajā fāzē savienojas ar imobilizētajiem hidrofobiem ligandiem stacionārā fāzē, savukārt hidrofīlie komponenti izdalās caur stacionāro fāzi, nepiestiprinoties pie nekustīgās fāzes virsmas..

01. attēls: HPLC iekārta

Turklāt šai metodei ir vairāk reproducējamības, salīdzinot ar citām hromatogrāfijas metodēm, un tai ir arī plaša pielietojamība. Tāpēc mēs izmantojam šo metodi laboratorijās vairāk nekā 75% no visām HPLC metodēm. Lielākoties kā kustīgo fāzi izmantojam ūdens ūdens maisījumu ar viegli sajaucamu polāro organisko šķīdinātāju. Tādējādi tas nodrošinās šķīdumā esošo hidrofobo komponentu piestiprināšanu pie nekustīgās fāzes virsmas.

Kas ir HIC?

Termins HIC nozīmē Hidrofobiskas mijiedarbības hromatogrāfija. Tas ir reversās fāzes HPLC veids, un šo metodi galvenokārt izmanto lielu biomolekulu, piemēram, olbaltumvielu, atdalīšanai. Šajā metodē mums ir jāizmanto ūdens vide, lai izgatavotu biomolekulas paraugu. Tas ir tāpēc, ka organiskie šķīdinātāji var izraisīt olbaltumvielu denaturāciju. Turklāt šajā paņēmienā tiek izmantota mijiedarbība starp lielām molekulām ar nedaudz hidrofobisku stacionārās fāzes virsmu. Turklāt mums paraugā ir jāizmanto augsta sāls koncentrācija, jo tas veicina olbaltumvielu saglabāšanu iesaiņojumā; šo procesu sauc par sālīšanu. Pamazām samazinot sāls koncentrāciju, mēs varam likt biomolekulām izdalīties atsevišķi pēc to hidrofobitātes.

Parasti šo metodi izmanto apstākļos, kas ir pretēji jonu apmaiņas hromatogrāfijas nosacījumiem. Šajā metodē, pirmkārt, caur kolonnu jāiziet buferšķīdums, lai samazinātu izšķīdušās vielas šķīdināšanu paraugā. Tas liek pakļauties olbaltumvielu hidrofobiem reģioniem. Tomēr, kad molekula ir hidrofobāka, saistīšanas veicināšanai nepieciešams mazāk sāls. Šeit vispirms tiek eluēti mazāk hidrofobie izšķīdinātie materiāli, un atbilstoši sāls koncentrācijas izmaiņām vairāk hidrofobu izšķīdušo vielu tiek eluēti pēdējie..

Kāda ir atšķirība starp RP HPLC un HIC?

Hromatogrāfija ir analītiska metode sastāvdaļu atdalīšanai maisījumā. RP HPLC un HIC ir divas specializētas hromatogrāfijas metodes. Galvenā atšķirība starp RP HPLC un HIC ir tāda, ka RP HPLC izmanto vairāk polāro mobilo fāzi un mazāk polāro stacionāro fāzi, turpretī HIC izmanto hidrofobisko stacionāro fāzi, kas ļauj hidrofobām molekulām piestiprināties tai.

Zemāk esošajā infografikā ir apkopota atšķirība starp RP HPLC un HIC.

Kopsavilkums - RP HPLC pret HIC

Atsauce:

1. “HPLC atdalīšanas režīmi”. Ūdeņi, pieejami šeit.

Attēla pieklājība:

1. GYassineMrabetTalk “Preparative HPLC” Šis W3C nenoteiktais vektora attēls tika izveidots, izmantojot Inkscape. - Savs darbs (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia

Zinātne un daba