Atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju

Galvenā atšķirība - silts vs Auksts Tripsinizācija

Siltā un aukstā tripsinizācija ir divas metodes, ko izmanto šūnu fermentatīvā sadalīšanā dzīvnieku šūnu kultivēšanā. galvenā atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju, kā norāda nosaukumi, ir atkarīga no temperatūras, kurā tripsīns tiek pievienots šūnu sadalīšanai. Siltā tripsinizācija notiek augstākas temperatūras apstākļos (36,5-37 ° C) ⁰C) tā kā aukstā tripsinizācija notiek zemas temperatūras apstākļos.

Dzīvnieku šūnu primārās šūnu kultivēšanas laikā tiek izmantotas trīs galvenās metodes, kas ir izrādījušās veiksmīgas. Trīs metodes ietver šūnu mehānisku sadalīšanu, šūnu fermentatīvu sadalīšanu un primāro eksplanta metodi. Šūnu fermentatīvais sadalījums, kas noved pie šūnu izolācijas, tiek veikts ar olbaltumvielu šķelšanas enzīma tripsīna palīdzību. Tādēļ šo procesu sauc par tripsinizāciju. Trypsinizāciju var veikt divos dažādos apstākļos, proti, siltā tripsinizācijā un aukstajā tripsinizācijā. Siltā tripsinizācija ir metode šūnu apstrādei ar tripsīnu siltos apstākļos 36,5 - 37 ° C temperatūrā ⁰C. Aukstā tripsinizācija ir tripsīna apstrādes process, kas notiek aukstākos apstākļos, vēlams ledus apstākļos, uzturot ļoti zemu temperatūru.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir siltā tripsinizācija
3. Kas ir aukstā tripsinizācija
4. Līdzības starp siltu un aukstu tripsinizāciju
5. Salīdzinājums blakus - silta un auksta tripsinizācija tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir silta tripsinizācija?

Tripsīnu var veikt, lai dezagregētu šūnu komponentus, lai šūnas izolētu, lai iegūtu primāro šūnu kultūru. Tripsīns ir olbaltumvielu sadalīšanās enzīms, un fermentu maisījums, ko izmanto tripsinizācijā, var būt gan neapstrādāts ekstrakts, gan attīrīts produkts. Tiek apgalvots, ka neapstrādātais ekstrakts ir efektīvāks olbaltumvielu sadalīšanās un šūnu sadalīšanās jomā, jo tas satur citus noārdinošos fermentus.

Siltā tripsinizācija ir visbiežāk izmantotā fermentatīvā metode šūnu sadalīšanai, kas notiek augstākas temperatūras apstākļos. Pirms apstrādes, izmantojot tripsinizāciju, vēlamos audus sasmalcina mazākos gabaliņos. Tas atvieglo vieglu sadalīšanas procesu. Pēc tam sasmalcinātos audus mazgā īpašā barotnē, ko sauc par pamata sāls barotni.

Pēc mazgāšanas pabeigšanas šūnas tiek pārveidotas kolbā, kurā ir aktīvais enzīms, kas ir tripsīns. Tā kā šī metode nozīmē siltu tripsinizācijas protokolu, tripsīnu ievieto aptuveni 37 ° C temperatūrā ⁰C apmēram četras stundas.

01. attēls: tripsīns

Saturs tiek sajaukts un sajaukts, izmantojot centrifugēšanas metodes, lai atvieglotu protokolu un paātrinātu sadalīšanas procesu. Kad ieteiktais laiks ir sasniegts, šūnas var iegūt no supernatanta. Pēc tam šūnas, kas iegūtas no supernatanta, inkubē noteiktā temperatūrā un laikā.

Kas ir aukstā tripsinizācija?

Aukstā tripsinizācija ir cits tippsinizācijas veids, kas notiek aukstos apstākļos. Šajā metodē sasmalcinātas un mazgātas šūnas ievieto flakonos uz ledus un pēc tam iemērc ar tripsīnu. Mērcēšanas periods ir daudz ilgāks - apmēram 6 - 24 stundas.

Pēc mērcēšanas procedūras tripsīnu noņem no šūnu lizāta un audu gabalus inkubē 37 ° C temperatūrā.⁰C apmēram 20 - 30 minūtes. Šūnas tiek sadalītas, atkārtojot audu maisījumu ar pipeti. Tas ļaus šūnām atdalīties no membrānas un nonākt virspusējā slānī. Kad šūnas atrodas supernatantā, tās inkubē un audzē vēlamajā temperatūrā un laika posmā.

Aukstā tripsinizācijas metodei ir vairākas priekšrocības

Lielāka dzīvotspējīgo šūnu raža, jo tiek samazināti šūnu bojājumi. Šūnu bojājums tiek samazināts līdz minimumam, neizmantojot centrifugēšanas soļus.
Ļoti ērta metode.
Mazāk darbietilpīga.

Aukstās tripsinizācijas metodes galvenais ierobežojums ir tāds, ka lielus daudzumus nevar izmantot vienā gadījumā.

Kādas ir siltas un aukstas tripsinizācijas līdzības??

Gan siltajā, gan aukstajā tripsinizācijas procesā šūnu dezagregācijai izmanto fermentu tripsīnu.
Šūnu kultivēšanas procedūrās šūnu sadalīšanai izmanto gan silto, gan auksto tripsinizācijas procesu.
Gan siltas, gan aukstas tripsinizācijas apstrādes procedūrās šūnas tiek iegūtas no supernatanta.

Kāda ir atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju??

Silta vs auksta tripsinizācija
Siltā tripsinizācija ir metode šūnu apstrādei ar tripsīnu siltos apstākļos 36,5 - 37 ° C temperatūrā ⁰.	Aukstā tripsinizācija ir tripsīna apstrādes process, kas notiek aukstākos apstākļos, vēlams ledus apstākļos, uzturot ļoti zemu temperatūru.
Protokols
Sasmalcinātos audu gabalus uztur 37 ° C temperatūrā ⁰C nepārtraukti visas procedūras laikā.	Sasmalcinātos audu gabalus sākotnēji uztur ledus aukstā temperatūrā un pēc tam 37 ° C temperatūrā ⁰.
Temperatūra
Siltā tripsinizācija notiek laikā no 36,5 līdz 37 ⁰	Aukstā tripsinizācija notiek aukstā ledus temperatūrā.
Laiks patērēts
Mazāks laiks nepieciešams visam siltas tripsinizācijas procesam (apmēram 4 stundas).	Ilgāks laiks (apmēram 6 - 24 stundas) nepieciešams aukstai tripsinizācijai.
Dzīvotspējīgu šūnu raža
Zema siltā tripsinizācija.	Augsta aukstuma tripsinizācija.
Centrifugēšanas izmantošana
Centrifugēšana ir nepieciešama šūnu sadalīšanai siltā tripsīnā.	Centrifugēšana nav nepieciešama aukstā tripsinizācijā.
Sākotnējais audu daudzums tripsinizācijai
Siltā tripsīnā var izmantot lielāku daudzumu audu.	Aukstā tripsīnā var izmantot mazāku audu daudzumu.
Šūnu bojājumi
Augsts centrifugēšanas dēļ siltā tripsīnā.	Mazāk aukstās tripsinizācijas dēļ.

Kopsavilkums - Silts vs Auksts Tripsinizācija

Trypsinizācija ir metode olbaltumvielu sadalīšanās fermenta tripsīna izmantošanai primāro šūnu kultūru sadalīšanai un sagatavošanai šūnu kultivēšanas procesā. Ir divas galvenās tripsinizācijas metodes, kuru pamatā ir procedūras laikā izmantotā temperatūra. Tās ir siltas un aukstas tripsinizācijas. Siltā tripsinizācija tiek veikta 37 ° C temperatūrā ⁰C tā kā aukstu tripsinizāciju veic ledusauksta apstākļos. Lai gan aukstā tripsīna pabeigšana prasa ilgāku laiku, tiek teikts, ka tai ir augstāka dzīvotspējīgo šūnu raža. Tas ir saistīts ar faktu, ka aukstā tripsīnā tiek samazināti šūnu bojājumi, jo tie neizmanto enerģiskas centrifugēšanas darbības. Šī ir atšķirība starp siltu un aukstu tripsinizāciju.

Atsauce:

1. “Trypsinization”. Tripsinizācija - pārskats | ScienceDirect tēmas. Pieejams šeit
2. “Primārā šūnu kultūra: 3 paņēmieni (ar diagrammu).” Bioloģijas diskusija, 2015. gada 16. oktobris. Pieejams šeit

Attēla pieklājība:

1.'Izmēģiniet aktīvo vietni'By Fdardel - Savs darbs, (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia

Zinātne un daba