Starpība starp benzonāzi un DNāzi

Galvenā atšķirība - benzonāze vs DNāze
 

Nukleīnskābju sadalīšanās ir svarīga daudzām molekulārās bioloģijas metodēm. To plaši izmanto rekombinantās DNS tehnoloģijā, lai atbrīvotos no nevēlamiem DNS un RNS fragmentiem. Nukleīnskābes noārdošos fermentus sauc par nukleāzēm, un tie var būt dažāda veida, pamatojoties uz nepieciešamo funkciju. Nukleāzes, kas noārda DNS, ir zināmas kā DNāzes, savukārt tās, kas noārda RNS, ir zināmas RNāzes. Šie fermenti galvenokārt tiek izmantoti in vitro eksperimenti kur iekšā in vitro tiek veikti molekulārie testi, lai izolētu tīru DNS, RNS vai olbaltumvielas. Benzonāzes ir nukleāžu veids, kas noārda gan DNS, gan RNS, savukārt DNāzes noārda tikai DNS. Šī ir galvenā atšķirība starp benzonāzi un DNāzi.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir benzonāze
3. Kas ir DNase
4. Līdzības starp benzonāzi un DNāzi
5. Salīdzinājums blakus - benzonāze vs DNāze tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir benzonāze?

Benzonāze ir ģenētiski izstrādāta endonukleāze no Serratia marcescens. Šis ferments tiek ražots E. coli saimnieki rūpnieciskā mērogā. Benzonāze spēj sadalīt divpavedienu DNS, lineāro DNS, apļveida DNS un vienpavedienu RNS. Tādējādi benzonāze ir komerciāli svarīga. Ferments benzonāze ir olbaltumvielu dimērs, kam ir 245 identiskas aminoskābes, ~ 30 kDa subvienības ar divām būtiskām disulfīdu saitēm. Benzonāze sašķeļ nukleīnskābes tā 5 'galā un veido fragmentus ar brīvajām 5'galām. Benzonāze var sadalīt nukleīnskābes jebkurā secībā, bet dod priekšroku reģioniem, kas bagāti ar GC.

Benzonāzi uzglabā -20 ° C ⁰C. Tiek atklāts, ka optimālais fermentu aktivitātes pH ir 8,0 - 9,2. Benzonāzes pielietojumos ietilpst parauga sagatavošana 2D olbaltumvielu gēla elektroforēzei, kurā benzonāze noņem saistītās nukleīnskābes un nukleīnskābju piemaisījumu noņemšanu no rekombinantiem olbaltumvielu preparātiem. To izmanto arī, lai samazinātu olbaltumvielu ekstraktu viskozitāti un novērstu šūnu salipšanu šūnu maisījumā.

Kas ir DNase?

DNāze ir nukleāzes hidrolītisks ferments, kas spēj šķelt tikai divpavedienu DNS. Ir divi galvenie DNāžu veidi: DNase I un DNase II. DNāze I piedalās divpavedienu DNS šķelšanā, lai iegūtu polinukleotīdus ar 5 'brīvajiem galiem. DNāze II ir iesaistīta divpavedienu DNS šķelšanā, lai iegūtu polinukleotīdu virknes ar 3 'brīvajiem galiem vai pārkarēm.

DNāze I

DNase I darbojas pie optimāla pH līmeņa no 7,0 līdz 8,0. Fermenta aktivitāte ir atkarīga no daudziem jonu kofaktoriem, ieskaitot Ca²⁺, Mg²⁺ vai Mn²⁺. Mg darbība²⁺ un Mn²⁺ nolemj DNase I funkciju. Mg klātbūtnē²⁺, DNāze I patstāvīgi šķeļ katru dsDNS virkni. Tas notiek nejauši. Turpretī Mn klātbūtnē^2+, ferments sadala abus DNS virzienus aptuveni tajā pašā vietā. Šīs šķelšanās rezultātā tiks ražoti divu veidu DNS fragmenti; viens tips ar neasiem galiem un otrs tips ar vienu vai diviem nukleotīdu pārkariem.

02 attēls: DNāze

DNāze II

DNase II funkcionē ar optimālu pH 4,5–5,0 un tā darbībai nepieciešami divvērtīgi metāla joni, līdzīgi kā DNase I. Ir zināms, ka DNase II mehānisms sastāv no trim galvenajiem posmiem..

1. DNS mugurkaulā tiek izraisīti vairāki vienas virknes pārtraukumi.
2. Tiek ražoti skābā šķīstošie nukleotīdi un oligonukleotīdi.
3. Pēdējā fāzē notiek nelineāra hiperhroma maiņa.

Galvenie DNāzes enzīma inhibitori ir metālu helāti, pārejas metāli un ķīmiskas vielas, piemēram, nātrija dodecilsulfāts un β-merkaptoetanols..

Galvenie DNāzes pielietojumi ietver RNS ekstraktu un olbaltumvielu ekstraktu, kas nesatur DNS, sagatavošanu un šablona DNS noņemšanu in vitro transkripcijas eksperimentu laikā.

Kādas ir līdzības starp Benzonase un DNase?

• Abi ir hidrolītiski fermenti.
• Abas ir nukleāzes.
• Abi piedalās, šķeļot nukleīnskābju fosfodiestera saites.
• Lai uzturētu fermenta aktivitāti, abiem nepieciešama optimāla pH un uzglabāšanas temperatūra.
• Fermentu inhibitori ietver helātus veidojošus līdzekļus, pārejas metālus un mazgāšanas līdzekļu ķimikālijas.
• Pieteikumi galvenokārt ir vērsti uz augstas tīrības pakāpes DNS, RNS un olbaltumvielu ekstraktu iegūšanu.
• Abus fermentus var ražot, izmantojot gēnu inženieriju.

Kāda ir atšķirība starp benzonāzi un DNāzi?

Benzonāze vs DNase
Benzonāze ir ferments, kas spēj sadalīt divpavedienu DNS, lineāro DNS, apļveida DNS un RNS.	DNāze ir ferments, kas spēj sadalīt divpavedienu DNS.
Fermenta substrāts
Gan DNS, gan RNS ir benzonāzes substrāti.	DNS ir DNāzes substrāts.
Uzbūve
Optimālais benzonāzes pH diapazons ir 7,0–8,0	DNāzes I optimālie pH diapazoni ir 7,0 - 8,0 un DNāze II ir 4,5 - 5,0.

Kopsavilkums - Benzonase vs DNase

Nukleāzes fermenti tiek plaši izmantoti dažādās eksperimentālās procedūrās attiecībā uz molekulāro bioloģiju un gēnu inženieriju. Benzonāze un DNāze ir divu veidu nukleāzes. Benzonāze ir iesaistīta gan DNS, gan RNS noārdīšanā, savukārt DNāze ir iesaistīta divpavedienu DNS šķelšanā. Šī ir galvenā atšķirība starp benzonāzi un DNāzi. Pašlaik abi šie nukleāzes veidi tiek ražoti, izmantojot rekombinantās DNS tehnoloģiju, kas dod augstākas kvalitātes fermentus, kas ir optimizēti maksimālai ražošanai.

Lejupielādējiet Benzonase vs DNase PDF versiju

Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts citēšanas piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet šeit PDF versiju. Starpība starp Benzonase un DNase

Atsauces:

1. “Dezoksiribonukleāze I no liellopu aizkuņģa dziedzera D5025.” Sigma-Aldrihs, pieejams šeit. Piekļuve 2017. gada 19. septembrim.
2. “Dezoksiribonukleāze II.” Dezoksiribonukleāze II - Worthington enzīma rokasgrāmata, pieejama šeit. Piekļuve 2017. gada 19. septembrim.

Attēla pieklājība:

1. “Hipertensīvi jutīga DNS vieta” - autori Vangs J-M, Džou P, Vangs L-Y, Li Z-H, Džans Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Korelācija starp DNase I paaugstinātas jutības vietņu izplatību un gēnu ekspresiju HeLa S3 šūnās. PLOS ONE 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / journal.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5), izmantojot Commons Wikimedia