Atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA

galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA ir tā konkurējošā ELISA testā izmanto inhibīcijas antigēnu, savukārt konkurējošā ELISA testā neizmanto inhibīcijas antigēnu.

Ar enzīmu saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA) ir imunoloģisks tests, kas nosaka dažādus mērķus, piemēram, antivielas, antigēnus, olbaltumvielas un glikoproteīnus. Tā ir ātra un vienkārša izpildes metode. Tāpēc to biežāk izmanto pētniecības un diagnostikas vajadzībām. ELISA ietver enzīmu izmantošanu un specifisku antivielu un antigēna saistīšanu. Balstoties uz to, kā notiek reakcijas, ir četri ELISA veidi: tieša ELISA, netieša ELISA, sviestmaizes ELISA un kavējoša ELISA. Tieša, netieša un sviestmaizes ELISA ir nekonkurētspējīgas ELISA veidi, savukārt inhibīcijas ELISA ir komplementāras ELISA veids. Šī raksta galvenais mērķis ir apspriest atšķirību starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir konkurējošā ELISA?
3. Kas ir nekonkurētspējīga ELISA
4. Līdzības starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA
5. Salīdzinājums blakus - konkurences un nekonkurētspējīga ELISA tabulas veidā
6. Kopsavilkums

Kas ir konkurējošā ELISA??

Konkurējošā ELISA nosaka antigēna koncentrāciju paraugā, atklājot signāla traucējumus. Šeit testā tiek izmantots inhibitora antigēns. Tādējādi tas ir kavēšanas veids ELISA. Šīs procedūras laikā paraugā esošie antigēni konkurē ar izvēlēto atsauces antigēnu par saistīšanos ar noteiktu daudzumu marķētās antivielas. Turklāt šī procedūra sākas ar parauga inkubēšanu ar pārmērīgu daudzumu marķētās antivielas. Arī atsauces antigēns būtu iepriekš jāpārklāj uz vairāku urbumu testa plāksnes. Tad parauga maisījums jāpievieno testa plāksnei, kurā ir atsauces antigēns. Brīvās antivielas saistās ar atsauces antigēnu atkarībā no antigēna daudzuma paraugā. Tādējādi, ja ir vairāk antigēna paraugu, tiks atklāts mazāk atsauces antigēna. Tādējādi tas rada vājāku signālu.

01. attēls: ELISA

Turpretī, kad paraugā ir mazāk antigēna, arvien vairāk un vairāk atsauces antigēna aizņem antivielas un dod spēcīgu signālu. Tā kā konkurējošā ELISA dod spēcīgāku signālu, ja paraugā ir mazs antigēnu daudzums, konkurējošā ELISA ir ļoti jutīgs tests, pat paraugiem ar nelielu antigēnu daudzumu.

Dažos konkurējošos ELISA komplektos marķētās antivielas vietā tiek izmantots marķēts antigēns. Šeit marķētais antigēns un parauga antigēns sacentīsies par saistīšanos ar primāro antivielu. Tāpat, ja antigēna daudzums paraugā ir mazs, marķētā antigēna daudzums, kas saistās ar antivielām, būs lielāks un radīs spēcīgāku signālu.

Kas ir nekonkurētspējīga ELISA?

Starp četriem ELISA veidiem trīs veidi ir nekonkurētspējīga ELISA. Tie ir tieša ELISA, netieša ELISA un sviestmaižu ELISA. Visi trīs formāti darbojas saskaņā ar kopējo ELISA principu ar nelielām atšķirībām to metodoloģijā.

Tiešā ELISA izmanto fermentu, kas marķēts ar primāro antivielu. Līdz ar to tai nav nepieciešama sekundāra antiviela. Tāpēc tiešā ELISA ir ātrāka nekā citi ELISA veidi. Primārā antiviela tieši saistīsies ar imobilizēto mērķa antigēnu, kas atrodas plāksnē. Līdz ar to notiks enzīma un substrāta reakcija, radot redzamu signālu.

02 attēls: sviestmaižu ELISA

Atšķirībā no tiešās ELISA, netiešā ELISA izmanto nemarķētu primāro antivielu un ar enzīmu marķētu sekundāro antivielu. Tiklīdz primārā antiviela saistās ar imobilizēto antigēnu, sekundārā antiviela saistās ar primāro antivielu. Sekundārajā antivielā esošais ferments reaģēs ar antigēnu un radīs redzamu signālu. Sviestmaižu ELISA atšķiras gan no tiešās, gan netiešās ELISA. Šeit antiviela tiek imobilizēta uz pārbaudes plāksnes sienas.

Kādas ir konkurences un nekonkurētspējīgās ELISA līdzības??

• Konkurējošā un nekonkurējošā ELISA ir divu veidu imūnsorbcijas analīzes metodes.
• Tās ir ļoti elastīgas un jutīgas metodes.
• Turklāt gan konkurējošā, gan nekonkurējošā ELISA ir ar enzīmiem saistītas imūnanalīzes.
• Arī abas metodes rada signālu fermenta-substrāta reakcijas dēļ.

Kāda ir atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA?

Konkurējošā ELISA ir tāda ELISA metode, kuras darbība ir atkarīga no ierobežota daudzuma specifisko antivielu pabeigšanas starp analizējamo antigēnu un marķēto antigēnu. No otras puses, nekonkurējošā ELISA testā nepastāv šāda konkurence starp interesējošo antigēnu un atsauces antigēnu. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA. Līdzīgi konkurējošā ELISA ir kavējoša ELISA, savukārt nekonkurējoša ELISA nav kavējoša ELISA. Tātad, šī ir arī atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.

Turklāt konkurējoša ELISA ir piemērotāka, lai izmērītu zemu interesējošā antigēna daudzumu. Tā ir jutīga metode. No otras puses, nekonkurētspējīga ELISA nav atkarīga no paraugā esošo antigēnu skaita. Tāpēc šī ir arī atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.

Zemāk infografika salīdzinoši izskaidro atšķirību starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA.

Kopsavilkums - Konkurences un nekonkurētspējīga ELISA

Konkurējošā un nekonkurējošā ELISA ir divi galvenie ELISA vai enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu veidi. Apkopojot atšķirību starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA, konkurējošā ELISA balstās uz konkurenci starp interesējošo antigēnu un atsauces antigēnu pret ierobežotu antivielu daudzumu. Tāpēc konkurējošo ELISA sauc arī par kavējošo ELISA. No otras puses, nekonkurētspējīga ELISA nav atkarīga no konkurences starp mērķa antigēniem un atsauces antigēniem. Interesantajai analītei izmanto pārmērīgu marķēto specifisko antivielu daudzumu. Tādējādi šī ir galvenā atšķirība starp konkurējošo un nekonkurējošo ELISA. Tiešie ELISA, netiešie ELISA un sviestmaižu ELISA ir trīs galvenie nekonkurētspējīgās ELISA veidi.

Atsauce:

1. Bio-Rad. “ELISA veidi | Bio-Rad. ” Bio, pieejams šeit.
2. “Četri ELISA veidi.” Kusabio dzīvības zinātne - jūsu bioloģijas zinātnes partneris, pieejams šeit.

Attēla pieklājība:

“Elisa tipus” Autors: Carolfv333 - Savs darbs (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedia.
NickCT “Sandwich Immunoassay, ELISA” - Savs darbs (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia