Atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA

Galvenā atšķirība - tieša vai netieša ELISA

Ar enzīmu saistītā imūnanalīze (ELISA), kas pazīstama arī kā enzīma imūnanalīze, ir seroloģisks tests, kas nosaka antivielas asinīs. To izmanto kā diagnostikas instrumentu, lai noskaidrotu, vai pacients ir bijis pakļauts noteikta veida vīrusam vai citam infekcijas izraisītājam (antigēnam) un vai ķermenis ir izveidojis antivielas pret infekciju. ELISA var arī noteikt pagātnes un pašreizējās infekcijas. Līdz ar to ārsti ELISA bieži izmanto kā pirmspārbaudes testu pirms slimību padziļinātas analīzes. Šo pārbaudi var veikt laboratorijā, ņemot pacienta asins paraugu. Ir divu veidu ELISA testi: tieša ELISA un netieša ELISA pārbaude. Galvenā atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA ir tā netiešā ELISA ir jutīgāka un prasa pievienot sekundāru antivielu kamēr tieša ELISA ir mazāk jutīga un izmanto tikai primāro antivielu.

SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir tiešā ELISA
3. Kas ir netiešā ELISA
4. Salīdzinājums blakus - tieša vai netieša ELISA
5. Kopsavilkums

Kas ir tiešā ELISA?

ELISA ir slimības diagnostikas pārbaude, ko veic, lai noteiktu noteiktu antigēnu vai antivielu klātbūtni asinīs. To veic kā šķīvju pārbaudi. Tas izmanto antivielas, kas saistītas ar viegli pārbaudāmiem fermentiem. Antigēnu klātbūtne seruma paraugā saistās ar specifiskām antivielām, kas saistītas ar fermentiem. Pēdējā posmā reaģēšanai ar fermentu pievieno īpašu substrātu. Ferments pārvērš substrātu krāsainā vai signālus radošā produktā. Krāsas izmaiņas ķīmiskajā substrātā atklāj noteiktas antivielas klātbūtni seruma paraugā. Tiešā ELISA testā tiek izmantota tikai primārā antiviela, kas saistīta ar enzīmu. Pēc saistīšanās ar antigēnu tas ātri maina krāsu, norādot uz infekcijas izraisītāja klātbūtni asinīs. Tomēr tiešajā ELISA testā signālu intensitāte ir vājāka, jo epitopi aprobežojas tikai ar antigēnu saistīšanos. Tādējādi tiešā ELISA ir mazāk jutīga salīdzinājumā ar netiešo ELISA.

01. attēls. Tiešais ELISA tests

Kas ir netiešā ELISA?

ELISA var veikt, izmantojot divu veidu antivielas, proti; primārā antiviela un sekundārā antiviela. Netiešais ELISA rīks izmanto abu veidu antivielas, lai pastiprinātu signālus labākai noteikšanai. Netiešo ELISA metodi veic šādi.

Plāksnes inkubē ar antigēniem un mazgā, lai bloķētu nespecifisko saistīšanos.
Pēc tam pievieno primārās antivielas un mazgā.
Pievieno ar enzīmu saistītu sekundāro antivielu un mazgā.
Pievieno substrātu un ļauj reaģēt ar fermentiem.
Signāli tiek atklāti un tiek identificēts specifiskā antigēna klātbūtne vai neesamība paraugā.

Netiešā ELISA testā vairākas primārās antivielas var saistīties ar vienu primāro antivielu. Sekundārās antivielas ir saistītas ar viegli pārbaudāmiem fermentiem. Tāpēc viena iesiešana var dot spēcīgu signālu vairāk nekā vienas mijiedarbības dēļ. Tādējādi netiešā ELISA ir jutīgāka nekā tieša ELISA. Tomēr netiešā ELISA var radīt nespecifiskus signālus sekundāro antivielu krustenisko reakciju dēļ.

02. Attēls. Netiešais ELISA tests

Kāda ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA?

Tieša vai netieša ELISA
Tiešā ELISA ir mazāk jutīga salīdzinājumā ar netiešo ELISA.	Netieša ELISA ir jutīgāka.
Laiks paņemts
Tiešais ELISA tests ir ātrs process.	Netiešā ELISA ir laikietilpīga.
Antivielu lietošana
Tiešā ELISA testā tiek izmantoti tikai viena veida antivielas (primārās antivielas).	Netiešai ELISA noteikšanai tiek izmantotas primārās un sekundārās antivielas.
Saikne ar fermentiem
Primārās antivielas ir saistītas ar fermentiem.	Sekundārās antivielas ir saistītas ar fermentiem.
Otro antivielu savstarpēja reaģēšana
Tiešā ELISA novērš otro antivielu krustenisko reaktivitāti.	Netiešo ELISA ietekmē otrā antivielu krusteniskā reaktivitāte.
Signāli
Signāli ir vāji, salīdzinot ar netiešo ELISA.	Signāli tiek pastiprināti netiešā ELISA testā. Tāpēc to ir viegli atklāt.

Kopsavilkums - tieša vai netieša ELISA

ELISA ir bioķīmiska metode, ko galvenokārt izmanto imunoloģijā, lai noteiktu antivielas vai antigēnu pacienta asins paraugā. To var veikt, izmantojot divus procesus, kas pazīstami kā tieša vai netieša ELISA. Tiešā ELISA testā antigēna noteikšanai izmanto tikai primārās antivielas, savukārt netiešā ELISA izmanto gan primārās, gan sekundārās antivielas. Tiešā ELISA testā primārās antivielas tiek marķētas, savukārt netiešajā ELISA antivielas tiek marķētas. Šī ir atšķirība starp tiešo un netiešo ELISA.

Atsauces
1. “Ar enzīmiem saistītais imūnsorbcijas tests (ELISA).” Pasaules Veselības organizācijas biļetens. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 1976. Web. 2017. gada 29. marts
2. Lūns, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen un J. Van Der Veen. “Ar enzīmu saistīts imūnsorbcijas tests, kas izmanto marķētu antigēnu imūnglobulīna M un A antivielu noteikšanai toksoplazmozē: salīdzinājums ar netiešo imūno fluorescenci un divkāršo sviestmaižu enzīmu saistīto imūnsorbcijas testu.” Vēstnesis par klīnisko mikrobioloģiju. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 1983. gada jūnijs. Web. 2017. gada 29. marts

Attēla pieklājība:
1. Cavitri “ELISA diagramma” - pašu darbs (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia
2. Cawang “Netiešā ELISA” - pašu darbs (CC0), izmantojot Commons Wikimedia

Zinātne un daba