Starpība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi

Galvenā atšķirība - horizontāla vs vertikāla gēla elektroforēze
 

Gēla elektroforēze ir laboratorijas paņēmiens, ko ģenētikā izmanto, lai atdalītu maisījumus, kas satur DNS, RNS un citas olbaltumvielas atbilstoši to attiecīgajam lādiņam un molekulārajam lielumam. DNS, RNS vai olbaltumvielas, kuras šajā metodē ir jāatdala, izlaiž caur želeju, kurā ir mazas poras. Molekulu caur gelu virza elektriskais lauks. Molekulas iziet cauri gēla porām, un kustības ātrums ir apgriezti proporcionāls to attiecīgajam garumam. Tāpēc molekulas ar mazāku molekulāro izmēru kustēsies ātrāk nekā molekulas ar lielāku molekulmasu. Elektrisko lauku rada maksas atšķirība divos gēla galos. Vienā galā ir pozitīvs lādiņš, bet otrā galā - negatīvs lādiņš. Tā kā DNS un RNS molekulas ir negatīvi lādētas, tās tiks piesaistītas pozitīvi lādētā gēla galā. Gēla elektroforēze var būt divās dažādās metodēs: horizontālā gēla elektroforēze un vertikālā gēla elektroforēze. Horizontālā gēla elektroforēzē gēls atrodas horizontālā orientācijā un ir iegremdēts nepārtrauktā darbības buferī, kas atrodas pašā gēla kārbā. Vertikālā gēla elektroforēzē buferu sistēma ir orientēta vertikāli un ir pārtraukta ar divām kamerām, kas atrodas attiecīgi augšpusē un apakšā ar attiecīgi katodu un anodu.. Šī ir galvenā atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi.

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir horizontālā gēla elektroforēze
3. Kas ir vertikālā gēla elektroforēze
4. Horizontālā un vertikālā gēla elektroforēzes līdzības
5. Salīdzinājums blakus - horizontāla un vertikāla gēla elektroforēze tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir horizontālā želejas elektroforēze?

Horizontālajā gela elektroforēzē tiek izmantota pamatteorija DNS, RNS vai olbaltumvielu molekulu atdalīšanai atbilstoši to attiecīgajam molekulu lielumam un lādiņam. Šajā tehnikā gēls atrodas horizontālā orientācijā un ir iegremdēts nepārtrauktā buferī. Agarozes želeju izmanto, lai želejas kārbu sadalītu divos nodalījumos. Gēla kārbas vienā galā ir anods, bet otrā - katods. Kad tiek pielietota strāva, šajā tehnikā izmantotais buferis ļauj izveidot uzlādes gradientu. Kad uzlāde tiek pielietota, želejai ir tendence sakarst. Buferis darbojas arī kā dzesēšanas šķidrums, kas uztur temperatūru optimālā līmenī. Notiekošā bufera recirkulācija novērš pH gradienta veidošanos. Nepārtrauktu buferu sistēmu nevar izmantot horizontālā gēla elektroforēzē, jo abi gēla sistēmas nodalījumi ir savienoti ar tekošo buferi. Grila elektroforēzes laikā akrilamīdu izmanto, lai atdalītu olbaltumvielu maisījumus.

01. attēls. Horizontālā gēla elektroforēze

Horizontālā gela elektroforēzē akrilamīdu nevar izmantot, jo gēla kārba ir pakļauta skābeklim. Sakarā ar skābekļa klātbūtni tiek kavēta akrilamīda polimerizācija, un tas traucē gēla veidošanos. Horizontālā gēla elektroforēze ir viegla metode, ko izmanto DNS un RNS atdalīšanai.

Kas ir vertikālā želejas elektroforēze?

Vertikālās gēla elektroforēzes tehnikas funkcijas darbojas saskaņā ar gēla elektroforēzes primāro teoriju, taču to uzskata par sarežģītāku nekā horizontālās gēla elektroforēzes metodi. Šajā tehnikā tiek izmantots pārtraukts buferis. Augšējā kamerā atrodas katods, bet apakšējā kamerā - anods. Katrā nodalījumā esošie elektrodi nodrošina nepieciešamo elektrisko lauku. Starp divām piestiprinātajām stikla plāksnēm ielej plānu gēla kārtu. Tāpēc augšējā želejas daļa ir iegremdēta augšējā kamerā, bet apakšējā - želejas apakšējā daļa. Kad strāva ir pielietota, neliela bufera daļa no augšējās kameras caur želeju virzās uz apakšējo kameru. Šajā tehnikā pielietotā strāva ir minūšu vienības.

02 attēls: vertikālas želejas elektroforēze

Vertikālā gēla elektroforēzē buferis plūst tikai caur gēlu. Tas ļauj precīzi kontrolēt sprieguma gradientu atdalīšanas posmā. Var izmantot akrilamīda želeju, jo nodalījumi nav pakļauti atmosfēras skābekļa iedarbībai. Sakarā ar mazāku akrilamīda gela poru izmēru precīzu atdalīšanu var panākt ar augstāku izšķirtspēju.

Kādas ir horizontālā un vertikālā gēla elektroforēzes līdzības?

• Abas sistēmas darbojas saskaņā ar gēla elektroforēzes pamat teoriju.
• Anodi un katodi tiek izmantoti, lai abās sistēmās nodrošinātu vajadzīgo elektrisko lauku.

Kāda ir atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi?

Horizontāla un vertikāla gēla elektroforēze
Horizontālā gēla elektroforēze ir gēla elektroforēzes metode, kurā gēls atrodas horizontālā orientācijā.	Vertikālā gēla elektroforēze ir gēla elektroforēzes metode, kurā gēls ir orientēts vertikāli.
Buferis
Horizontālā gēla elektroforēze sastāv no nepārtraukta bufera.	Vertikālā gēla elektroforēzē tekošais buferis ir pārtraukts.
Akrilamīda lietošana
Akrilamīdu nevar izmantot horizontālā gēla elektroforēzē, jo gēla kārba ir pakļauta atmosfēras skābeklim.	Tā kā želeja nav pakļauta atmosfēras skābeklim divu atsevišķu kameru dēļ, vertikālajā gela elektroforēzē varētu izmantot akrilamīdu.
Funkcija
DNS un RNS maisījumu, bet ne olbaltumvielu, atdalīšanai biežāk izmanto horizontālo gēla elektroforēzi.	Olbaltumvielu maisījumu atdalīšanai izmanto vertikālu gēla elektroforēzi.

Kopsavilkums - horizontāla un vertikāla gēla elektroforēze

Gēla elektroforēze ir laboratorijas paņēmiens, ko plaši izmanto, atdalot maisījumus, kas satur DNS, RNS un olbaltumvielu molekulas. Ir divas gēla elektroforēzes metodes: horizontālā un vertikālā gēla elektroforēze. Horizontālā gēla elektroforēzē tekošais buferis ir nepārtraukts, savukārt vertikālā gēla elektroforēzes gadījumā tas ir pārtraukts. Šī ir atšķirība starp horizontālo un vertikālo gēla elektroforēzi. Abas sistēmas darbojas saskaņā ar vispārīgo gela elektroforēzes principu.

Lejupielādējiet horizontālas un vertikālas želejas elektroforēzes PDF versiju

Varat lejupielādēt šī raksta PDF versiju un izmantot to bezsaistes vajadzībām, kā norādīts citēšanas piezīmē. Lūdzu, lejupielādējiet šeit PDF versiju. Starpība starp horizontālā un vertikālā gēla elektroforēzi.

Atsauces:

1.Warren, Chad M., et al. “Vertikālas agarozes gela elektroforēze un augstu molekulmasu olbaltumvielu elektrolītiskā noteikšana.” Elektroforēze, vol. 24, nē. 2003. gada 11. lpp., 1695. – 1702. Lpp., Doi: 10.1002 / elps.200305392..
2. “Horizontālās un vertikālās gēla sistēmas - horizontālā gēla sistēma.” Nacionālā diagnostika, pieejama šeit. Piekļuve 2017. gada 28. augustam.

Attēla pieklājība:

1. Džefrija M. Vinocura “Gēla elektroforēzes aparāts” - Savs darbs (CC BY 2.5), izmantojot Commons Wikimedia
2. “Olbaltumvielu poliakrilamīda gēla elektroforēze”, autors Žans Etjēns Minh-Duy Poirrier no Briselē, Beļģijā - olbaltumvielas 1D gēla elektroforēzē (CC BY-SA 2.0), izmantojot Commons Wikimedia