Starpība starp PCR un reālā laika PCR

PCR vs reāllaika PCR

PCR vai polimerāzes ķēdes reakcija ir revolucionārs atklājums mūsdienu molekulārajā bioloģijā, kuru 1983. gadā pirmo reizi izstrādāja ķīmiķis Karijs Mullis. Tas ļauj analīzei amplificēt vienu kompleksa DNS secību. PCR pamatideja ir tāda, ka divi grunti, kas papildina DNS sekvences pretējos virzienus, ir orientēti viens pret otru; grunti veido papildu komplektus, katrs satur otru grunti. Tādējādi rezultāts ir liels sekvences daudzums, kas atbilst DNS, kas atrodas starp diviem praimeriem. DNS polimerāzes enzīmu izmanto, lai pagarinātu praimeri PCR. DNS polimerāze ir termostabils enzīms, un tai piemīt spēja izdzīvot augstā temperatūrā (94 līdz 95 ° C), ko izmanto matricas DNS denaturēšanai.

PCR ietver trīs posmus, proti, atkārtotas denaturācijas kārtas, praimeru atkvēlināšana un DNS sintēze. Šīs reakcijas veikšanai tiek izmantota termocikliska mašīna, lai to varētu ieprogrammēt ātri un precīzi mainīt temperatūru. PĶR lietojumi ir kriminālizmeklēšana, DNS pirkstu nospiedumi, patogēnu noteikšana un agrīnu cilvēku sugu DNS analīze.

Kas ir parastais PCR?

Pastāv trīs galvenās parasto PCR stadijas, proti: DNS amplifikācijas posms, PCR atdalīšana un produktu noteikšana. DNS segmentus parasti atdala ar agarozes gēla elektroforēzi. Pēc tam produktus iekrāso ar etiimīma bromīdu. Visbeidzot, noteikšanu panāk, vizualizējot joslas uz želejām UV gaismā. Tāpēc parastās PCR galīgie rezultāti nav izteikti kā skaitļi. Parasti ar parasto PCR var noteikt tikai vienu parametru.

Kas ir reālā laika PCR?

Reāllaika PCR var noteikt produktu pastiprinājumu, jo produkti tiek sintezēti. Attīstoties tehnoloģijai, PCR ir kļuvis par ļoti populāru paņēmienu, īpaši baktēriju noteikšanai un identificēšanai pārtikā. Reālā laika PCR izmanto fluorescējošu krāsu sistēmu un termocikleri, kas aprīkoti ar fluorescences noteikšanas iespējām.

Kāda ir atšķirība starp parasto PCR un reālā laika PCR?

• Parastā PCR prasa vairāk laika, jo pastiprinātu PCR produktu analīzei izmanto gēla elektroforēzi. Turpretī reālā laika PCR prasa mazāk laika, jo tas var noteikt amplifikācijas reakcijas agrīnajās fāzēs.

• Reālā laika PCR vāc datus PCR eksponenciālā pieauguma fāzē, bet tradicionālā PCR vāc datus reakcijas beigu punktā..

• Parastās PĶR beigu punkta rezultāti var nebūt precīzi, bet reālā laika PĶR rezultāti ir ļoti precīzi.

• Reālā laika PCR ir jutīgāka nekā parastā PCR.

• Parastajai PCR ir ļoti slikta izšķirtspēja, savukārt reālā laika PCR augstas izšķirtspējas dēļ var atklāt ļoti maz izmaiņu.

• Parastās PCR beigu punkta noteikšanai ir mazs dinamiskais diapazons, savukārt reālā laika PCR noteikšanai ir plašs dinamiskais diapazons.

• Atšķirībā no parastajām PCR, reāllaika PCR tiek atrastas automatizētas noteikšanas metodes.

• Parastā PCR ir ļoti sarežģīta un darbietilpīga vairāk nekā reālā laika PCR.

• Atšķirībā no reāllaika PCR, parastais PCR nevar atšķirt mirušās un dzīvās baktērijas.

• Reāllaika PCR izmanto fluorescējošu krāsvielu sistēmu produktu noteikšanai, bet parastā PCR izmanto etiīdija bromīdu un UV gaismu, lai vizualizētu joslas agarozes gela vidē..