Atšķirība starp SDS lapu un Western Blot

Galvenā atšķirība - SDS lapa vs Western Blot
 

Western blotings ir paņēmiens, kas nosaka noteiktu olbaltumvielu no olbaltumvielu parauga. Šo paņēmienu veic, izmantojot vairākas galvenās darbības: gēla elektroforēzi, blotēšanu un hibridizāciju. Nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gela elektroforēze (SDS lapa) ir sava veida gēla elektroforēzes paņēmiens, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai pēc to lieluma (molekulārā svara). Western blot ir īpaša blotēšanas membrānas lapa, kuru izmanto, lai SDS lappusē pārnestu to pašu olbaltumvielu paraugu. Galvenā atšķirība starp SDS lapu un Western blot ir tā SDS lapa ļauj atdalīt olbaltumvielas maisījumā kamēr Western blot ļauj noteikt un noteikt noteiktu olbaltumvielu daudzumu maisījumā. Abas ir noderīgas olbaltumvielu analīzes pētījumos.

SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir SDS lapa
3. Kas ir Rietumu blots
4. Salīdzinājums blakus - SDS lapa pret Western Blot
5. Kopsavilkums

Kas ir SDS lapa?

SDS lapa ir gēla elektroforēzes metode, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai. To parasti izmanto bioķīmijā, ģenētikā, kriminālistikā un molekulārajā bioloģijā. Kad olbaltumvielas ir ekstrahētas no parauga, tās darbina ar želeju, kas sastāv no SDS un poliakrilamīda. SDS ir anjonu mazgāšanas līdzeklis, ko izmanto olbaltumvielu (denaturētu proteīnu) linearizēšanai un linearizētu olbaltumvielu negatīva lādiņa piešķiršanai proporcionāli to molekulārajai masai. Poliakrilamīds kļūst par cieto gēla atbalstu. Denaturēti proteīni, kas ir negatīvi lādēti, caur želeju migrē aparāta pozitīvā gala virzienā. Atkarībā no olbaltumvielu lieluma, olbaltumvielu migrācijas ātrums atšķiras, un notiek atdalīšanās. Tāpēc SDS lapa ir noderīga atsevišķu olbaltumvielu atdalīšanai, ņemot vērā to lielumu.

Poliiakrilamīda gēla sagatavošana olbaltumvielu frakcionēšanai ir izšķirošs solis SDS. Pareizā poliakrilamīda koncentrācija un izmantotā šķērssavienojuma veida tips spēcīgi ietekmē gēla fizikālās īpašības, kas faktiski padara dažādu olbaltumvielu atdalīšanu. Lai efektīvi atdalītu, želejas poru lielumi ir pareizi jāpārvalda. Tomēr SDS lapa tiek uzskatīta par augstas izšķirtspējas olbaltumvielu atdalīšanas paņēmienu.

SDS Page metodei ir būtisks ierobežojums olbaltumvielu analīzē. Tā kā SDS pirms atdalīšanas denaturē olbaltumvielas, tas neļauj noteikt fermentatīvo aktivitāti, mijiedarbību ar olbaltumvielām, olbaltumvielu kofaktorus utt..

01. attēls: SDS lapa

Kas ir Rietumu blots?

Western blotēšanas paņēmiens ļauj noteikt noteiktu olbaltumvielu no olbaltumvielu maisījuma un izmērīt olbaltumvielu daudzumu un molekulmasu. Western blot ir membrāna, ko izmanto blotēšanas procedūras laikā, lai iegūtu SDS-poliakrilamīda gēla olbaltumvielu paraugu spoguļattēlu. Membrāna, ko izmanto rietumu blotēšanai, galvenokārt sastāv no nitrocelulozes vai polivinilidēna difluorīda (PVDF). Membrānu ar pārnesto olbaltumvielu var izmantot, lai identificētu vēlamo olbaltumvielu. Lai noteiktu hibrīdi, vēlamā proteīna noteikšanai nepieciešama augstas kvalitātes antiviela. Antiviela saistās ar tās specifisko antigēnu un atklāj vēlamā antigēna, kas ir olbaltumviela, klātbūtni.

Olbaltumvielu pārnešana no SDS poliakrilamīda gela uz Western blot tiek veikta ar elektrolītisko blotēšanu. Tā ir efektīva un ātra metode, kas izraisa olbaltumvielu elektroforēzi no gēla un nonāk uz nitrocelulozes membrānas (Western blot).

02 attēls: Rietumu blots

Kāda ir atšķirība starp SDS lapu un Western Blot?

SDS lapa pret Rietumu blotu
SDS lapa ir gēla elektroforēzes metode.	Western blot ir paņēmiens, ko veic uz membrānas, lai noteiktu specifisku olbaltumvielu maisījumā.
Izmantojiet
SDS lapa ļauj atdalīt olbaltumvielas pēc to lieluma.	Western blot ļauj pārnest olbaltumvielas SDS lappuses želejā, nemainot tā modeli un ļauj hibridizēties ar specifiskām antivielām.
Trūkumi
Šīs metodes trūkumi ir olbaltumvielu denaturēšana, augstās izmaksas un neirotoksīnu ķīmisko vielu klātbūtne.	Šis paņēmiens prasa daudz laika, un tam ir nepieciešami labi pieredzējuši personīgi un īpaši kontrolēti apstākļi.

Kopsavilkums - SDS lapa vs Western Blot

SDS lapa un Western blot ir divas metodes olbaltumvielu analīzē. SDS lapa ļauj viegli atdalīt olbaltumvielas želejā pēc to molekulmasas. Western blot palīdz noteikt specifiska proteīna klātbūtni un daudzumu, hibridizējoties ar specifiskām antivielām. Šī ir atšķirība starp SDS lapu un Western blot.

Atsauces:
1. Blanšers, C. un A. Džounss. “SDS-PAGE un Western blotting tehnika.” Metodes molekulārajā medicīnā. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, n.d. Web. 2017. gada 27. marts
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig un David H. Petering. “Vietējā SDS-PAGE: olbaltumvielu augstas izšķirtspējas elektroforētiska atdalīšana, saglabājot dabiskās īpašības, ieskaitot saistītos metāla jonus.” Metalomika: integrēta biometāla zinātne. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 2014. gada maijs. Tīmeklis. 2017. gada 27. marts.

Attēla pieklājība:
1. “SDS-PAGE elektroforēze” Autors Bensaccount angļu valodas Vikipēdijā (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia
2. “Western blot 114A”, autors Amanthabagdon - pašu darbs (publiskais īpašums), izmantojot Commons Wikimedia