Atšķirība starp SDS un sākotnējo lapu

Galvenā atšķirība - SDS lapa salīdzinājumā ar vietējo Lappuse
 

SDS un vietējā lapa ir divu veidu poliakrilamīda gela elektroforēzes paņēmieni, kurus izmanto molekulārajā bioloģijā. galvenā atšķirība starp SDS lapu un sākotnējo lapu ir izmantotā poliakrilamīda gela tips. Tāpēc SDS lapā tiek izmantots denaturējošs gēls, tāpēc molekulas tiek atdalītas, pamatojoties uz to molekulmasu. Pretstatā Native Page tiek izmantoti nedenaturējoši gēli. Tāpēc molekulas tiek atdalītas, ņemot vērā to lielumu, lādiņu un formu.

Poliiakrilamīda gēla elektroforēzē (lappuse) tiek izmantots gēls, kas izgatavots, polimerizējot akrilamīda monomērus ar metilēna bisakrilamīdu. Poliakrilamīds ir stingrāks un siltumizturīgāks nekā agaroze. Poliakrilamīda želejām ir mazāks poru lielums, kas ļauj efektīvi atdalīt olbaltumvielas. Ir divi galvenie lapu iestatīšanas veidi, proti, SDS lapa un vietējā lapa. SDS lapa vai Nātrija-dodecilsulfāta poliakrilamīda gela elektroforēze atdala olbaltumvielas, pamatojoties uz to molekulmasu. Denaturēšanas želejas tiek izmantotas SDS lappusē. Vietējā lapa izmanto nedenaturējošus gēlus un atdala olbaltumvielas, ņemot vērā to lielumu, lādiņu un formu (3D uzbūve).

SATURS

1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir SDS lapa
3. Kas ir vietējā lapa
4. SDS lapas un vietējās lapas līdzības
5. Salīdzinājums blakus - SDS lapa un vietējā lapa tabulas formā
6. Kopsavilkums

Kas ir SDS lapa?

SDS lapa ir visizplatītākā elektroforēšanas metode, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai, pamatojoties uz to molekulmasu. Gēlu izgatavo, pievienojot SDS (nātrija dodecilsulfātu), kas ir mazgāšanas līdzeklis. SDS protē proteīnus monomēros. SDS ir anjonu mazgāšanas līdzeklis. Tāpēc tas pievieno olbaltumvielām tīru negatīvu lādiņu plašā pH diapazonā. Kad olbaltumvielu molekulām tiek uzlikts tīrais negatīvais lādiņš, lādiņa variācijas dēļ tiek sadalītas sarežģītās struktūras. Negatīvā lādiņa dēļ olbaltumvielas piesaista pozitīvā gala virzienā. Tādējādi molekulas ar zemāku molekulmasu ātrāk pārvietojas pa gela matricu un ir novērojamas tuvu anodam, turpretī augstākas molekulmasas proteīni tiek novēroti tuvāk iedobēm..

01. attēls: SDS lapa

SDS saistīšanās ar polipeptīdu ķēdi ir proporcionāla tās relatīvajai molekulmasai. Tāpēc molekulmasu var noteikt arī caur SDS. SDS Page gelu krāsošanu veic ar bromfenola zilo krāsošanu. SDS lapu lietojumi lielākā mērā ir diapazonā, ja to var izmantot, lai novērtētu relatīvo molekulmasu un noteiktu relatīvo olbaltumvielu daudzumu proteīnu maisījumā. SDS lapu var izmantot arī, lai noteiktu olbaltumvielu sadalījumu olbaltumvielu maisījumā. SDS lapa tiek izmantota arī olbaltumvielu attīrīšanai un novērtēšanai. To izmanto kā provizorisku procedūru rietumu blotēšanai un hibridizācijai, ko savukārt izmanto olbaltumvielu kartēšanai un identificēšanai.

Kas ir vietējā lapa?

Vietējā poliakrilamīda gela elektroforēzē (Dzimtā lapa) tiek izmantots gens, kas nedenaturē. Tādēļ SDS vai jebkuru citu denaturējošu līdzekli gela matricai nepievieno. Native Page olbaltumvielu atdalīšanas pamatā ir lādiņš un olbaltumvielu lielums. Tāpēc olbaltumvielu mobilitāte ir atkarīga no lādiņa un olbaltumvielu lieluma.

Olbaltumvielu lādiņš ir atkarīgs no aminoskābju sānu ķēdēm. Ja sānu ķēdes ir negatīvi lādētas, olbaltumvielas saņem kopējo negatīvo lādiņu un otrādi. Olbaltumvielas saglabā 3D konformāciju notiekošās locīšanas dēļ. Salocīšana rodas no vairākiem olbaltumvielu saišu veidiem, piemēram, disulfīdu saitēm, hidrofobām mijiedarbībām un ūdeņraža saitēm. Tāpēc, ja dabiskā lapa tiek pārnesta neitrālā pH līmenī, olbaltumvielas tiks atdalītas atbilstoši olbaltumvielu molekulārajai formai. Tāpēc vietējo lapu var izmantot kā jutīgu paņēmienu, lai noteiktu olbaltumvielu lādiņa vai konformācijas izmaiņas.

Vietējās lapas galvenā priekšrocība ir tā, ka lapas analīzei izmantotās olbaltumvielas sākotnējā stāvoklī var atgūt pēc Lapas analīzes, jo olbaltumvielas procesa laikā netiek traucētas. Vietējā lapa ir salīdzinoši augsta caurlaides spēja, un olbaltumvielu stabilitāte ir palielināta.

02. Attēls. Vietējā lapa

Pabeidzot gēla darbību, Native Page gelu var apskatīt, iekrāsojot ar bromfenola zilu vai citu piemērotu krāsošanas reaģentu. Vietējās lapas lietojumos ietilpst skābu olbaltumvielu, tostarp glikoproteīnu, piemēram, cilvēka rekombinantā eritropoetīna, atdalīšana vai liellopu seruma albumīnā (BSA) esošo olbaltumvielu identificēšana..

Kādas ir līdzības starp SDS lapu un vietējo lapu?

• Gan SDS lapas, gan vietējās lapas sistēmās kā gela matricu tiek izmantots poliakrilamīda gēls.
• Abi tiek izmantoti olbaltumvielu atdalīšanai un identificēšanai.
• Lai savienojumus atdalītu, abi izmanto elektroforētisko kustīgumu.
• Abas var veikt vertikāli vai horizontāli (galvenokārt kā vertikālas lapas iestatījumus, jo izlaišanas garums ir lielāks).
• Abu metožu darbībai ir nepieciešams elektroforēzes aparāts, ieskaitot gēla tvertni, ķemmes, barošanas avotu.
• Gēla vizualizāciju var veikt, izmantojot abās metodēs iekrāsošanas metodes.

Kāda ir atšķirība starp SDS lapu un vietējo lapu?

SDS lapa salīdzinājumā ar vietējo lapu
SDS lapa vai nātrija-dodecilsulfāta lapa atdala olbaltumvielas, pamatojoties uz to molekulmasu, un tajā tiek izmantots denaturējošs gēls.	Vietējā lapa izmanto nedenaturējošus gēlus un atdala olbaltumvielas, ņemot vērā to lielumu, lādiņu un formu (3D uzbūve).
Želejas tips
SDS lapā tiek izmantots denaturējošs gēls.	Vietējā lapā tiek izmantots denaturējošs gēls.
SDS klātbūtne
SDS ir mazgāšanas līdzeklis, kas SDS lapā paraugam rada negatīvu lādiņu.	Vietējā lapā SDS nav.
Atdalīšanas pamats
Olbaltumvielu atdalīšana ir atkarīga no olbaltumvielu molekulmasas SDS lapā.	Atdalīšana ir atkarīga no olbaltumvielu molekulas lieluma un formas dzimtajā lapā.
Olbaltumvielu stabilitāte
SDS lapā olbaltumvielu stabilitāte ir zema.	Vietējā lapā olbaltumvielu stabilitāte ir augsta.
Oriģinālās olbaltumvielas atgūšana
Nav iespējams, jo tas ir denaturēts SDS lapā.	Iespējams dzimtajā lapā.

Kopsavilkums - SDS lapa pret vietējo Lappuse

SDS lapa un vietējā lapa ir divu veidu poliakrilamīda gela elektroforēzes paņēmieni, ko izmanto olbaltumvielu atdalīšanai. SDS lapu apstrādā ar mazgāšanas līdzekli, ko sauc par SDS. SDS proteīnam rada vispārēju negatīvu lādiņu, kura rezultātā proteīns tiek denaturēts. Tāpēc olbaltumvielas tiek atdalītas, pamatojoties uz to molekulmasu. Turpretī vietējās lapas tehnikā netiek izmantoti nekādi denaturējoši līdzekļi. Tādējādi olbaltumvielas vai nu tiek atdalītas, pamatojoties uz to lielumu vai formu. Šī ir atšķirība starp SDS lapu un vietējo lapu.

Atsauce:

1. “Poliakrilamīda gēla elektroforēzes princips un metode (SDS-PAGE).” Poliakrilamīda gēla elektroforēzes princips un metode (SDS-PAGE) | MBL Life Sience -ASIA-. Pieejams šeit
2. “Vietējie želejas”. Alianses olbaltumvielu laboratorijas | Biofizikālo raksturojumu pakalpojumi. Pieejams šeit  

Attēla pieklājība:

1.'SDS-PAGE elektroforēze'By Bensaccount angļu valodas Vikipēdijā (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia  
2.'Ielieciet paraugu poliakrilamīda gela elektroforēzes iedobē 'Blaz Nemec no Ļubļanas, Slovēnijas (CC BY-SA 2.0), izmantojot Commons Wikimedia