Vektorus izmanto molekulārajā klonēšanā. Vektoru var definēt kā DNS molekulu, kas darbojas kā nesējs sveša ģenētiskā materiāla pārvadāšanai citā šūnā. Vektors, kas satur svešu DNS, ir pazīstams kā rekombinantā DNS, un tam vajadzētu būt spējīgam to replicēt un izteikt saimniekorganismā.. Rauga mākslīgā hromosoma (YAC) un baktēriju mākslīgā hromosoma (BAC) ir divu veidu vektori, kas iesaistīti klonēšanā. Galvenā atšķirība starp YAC un BAC ir tā YAC ir mākslīgi veidota vektoru sistēma, kas izmanto noteiktu rauga hromosomas reģionu, lai rauga šūnās ievietotu lielus ģenētisko materiālu segmentus. kamēr BAC ir mākslīgi veidota vektoru sistēma, kurā tiek izmantots īpašs E. coli hromosoma, lai ievietotu lielus DNS segmentus E. coli šūnas.
SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir YAC vektori?
3. Kas ir BAC vektori?
4. Salīdzinājums blakus - YAC pret BAC vektoriem
5. Kopsavilkums
YAC (rauga mākslīgā hromosoma) ir mākslīgi veidota hromosoma, kurai ir spēja nēsāt lielu svešas DNS segmentu un replicēties rauga šūnās. Tam ir centromērs, telomēri, kā arī autonomi replicējošas sekvences, kas ir būtiskas replicēšanai un stabilitātei. YAC vajadzētu būt arī ar selektīvu marķieri vai marķieriem un restrikcijas vietām, lai tas būtu efektīvs klonēšanas vektors. Lielu sekvenci no 1000 kb līdz 2000 kb var ievietot YAC un pārnest uz raugu. YAC pārveidošanas efektivitāte ir ļoti zema.
01. attēls: YAC vektors
Baktēriju mākslīgā hromosoma (BAC) ir mākslīgi veidota hromosoma molekulārajai klonēšanai. Tai ir īpaši reģioni E. coli F plazmīda, un tā ir apļveida un ļoti spirālveidota. BAC ir izstrādāts, lai klonētu DNS fragmentus baktērijām, it īpaši baktērijām E. coli. Tajā var būt DNS fragmenti ar izmēru līdz 300 kb. Salīdzinot ar YAC, BAC klonēšanas ieliktņi ir mazāki. BAC tika izstrādāti 1992. gadā, un tas joprojām ir populārs, pateicoties tā stabilitātei un celtniecības vienkāršībai. BAC ir noderīgi arī vakcīnu izstrādē.
02 attēls: BAC vektors molekulārajā klonēšanā
YAC vs BAC vektori | |
YAC ir ģenētiski inženierijas hromosoma, kuras klonēšanai tiek izmantota rauga DNS. | BAC ir ģenētiski modificēta DNS molekula, kas izmanto E. coli DNS klonēšanas nolūkā. |
Dzimums | |
YAC tika izstrādāti lielu genoma DNS fragmentu klonēšanai raugā. | BAC tika izstrādāti lielu genoma fragmentu klonēšanai Escherichia coli. |
Ievietot garumu | |
YAC var saturēt megabāzes lieluma genoma ieliktņus (1000 kb - 2000 kb). | BAC var nest ieliktņus ar izmēru 200-300 kb vai mazāk. |
Būvniecība | |
YAC DNS ir grūti attīrīt neskartu, un YAC vektoru sistēmas izveidošanai nepieciešama augsta koncentrācija. | BAC ir viegli tīrāms neskarts, un to var viegli izveidot. |
Chimerism | |
YAC bieži ir himēriski. | BAC reti ir himēriski. |
Stabilitāte | |
YAC ir nestabila. | BAC ir stabils. |
Modifikācijas | |
Rauga rekombinācija ir ļoti iespējama un vienmēr paliek aktīva. Līdz ar to tas var radīt dzēšanas un citus pārkārtojumus YAC. | E. coli rekombinācija tiek novērsta un pēc nepieciešamības tiek ieslēgta. Tādējādi tas samazina nevēlamos pārkārtojumus BAC. |
Apkope | |
Manipulējot rekombinantos YAC, parasti YAC jāpārnes E. coli turpmākām manipulācijām. Tāpēc tas ir darbietilpīgs process. | BAC modifikācija notiek tieši E. coli. Tātad nav nepieciešama DNS nodošana. Tādējādi process nav darbietilpīgs. |
YAC ir kļuvis par būtisku pētījumu instrumentu klonēšanas procesos, pateicoties tā spējai klonēt lielus DNS fragmentus saimniekorganismā. Tomēr YAC ir vairāki vektoru trūkumi, piemēram, konstrukcijas grūtības, chimerisms, nestabilitāte utt. Tāpēc, lai pārvarētu šīs problēmas, zinātnieki ir izstrādājuši BAC vektorus. BAC ir izveidots, izmantojot īpašus E. coli hromosoma. Tas ir stabils vektors un to var viegli izveidot. Tomēr DNS garums, ar kuru BAC var rīkoties, ir līdz 20 reizēm mazāks nekā YAC. Šī ir atšķirība starp YAC un BAC vektoru sistēmām. Mūsdienās BAC ir labāks priekšroka nekā YAC laboratorijās.
Atsauces
1. Šero, Dž. H., M. K. Makormiks, S. E. Antonarakis un P. Hīters. "Rauga mākslīgie hromosomu vektori efektīvai manipulācijai ar klonu un kartēšanai." Genomika.U.S. Nacionālā medicīnas bibliotēka, 1991. gada jūnijs. Web. 2017. gada 25. marts
2. Ramsay, M. “Rauga mākslīgā hromosomu klonēšana.” Molekulārā biotehnoloģija. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 1994. gada aprīlis. Web. 2017. gada 25. marts
Attēla pieklājība:
1. Tinastella “BAC klonēšanas vektori Chem114A” - (CC BY-SA 3.0), izmantojot Commons Wikimedia