Atšķirība starp RT-PCR un QPCR

Reversās transkripcijas polimerāzes ķēdes reakcija (RT-PCR)

RT-PCR pret QPCR

Biotehnoloģijas sasniegumu rezultātā ir atklāti vairāki veidi, kā gadu gaitā tikt galā ar pieprasījumu pēc orgānu transplantācijas. Pirms tam indivīds, kurš tūlīt pēc nāves labprātīgi ziedos jebkuru orgānu pacientam, kam tas nepieciešams, varēja tikai sākt operāciju ar transplantātiem. Biologu nepārtrauktie pētījumi un pētījumi noved pie cilmes šūnu atklāšanas.

Cilmes šūnas attiecas uz tām, kuras tiek ņemtas no embrija DNS un kuras kalpos par avotu tādu šūnu reģenerācijai, kuras būtībā būtu orgāna klons, no kura iegūts DNS. Kaut arī cilvēktiesību aktīvisti lobē šādu procedūru apturēšanu, veiksmīgas operācijas patiešām ir pierādījušas cilmes šūnu attīstības efektivitāti orgānu transplantācijā.

Pirms cilmes šūnas var novērtēt un pilnībā izprast, ir jāiepazīstas ar dažādajām terminoloģijām, kas saistītas ar šo zinātnisko atklājumu. Cilmes šūnu audzēšana nodarbojas ar DNS un tās kodēšanu. Tādējādi studentiem vai jebkurai ieinteresētai personai ir svarīgi atšķirt RT-PCR no qPCR.

Reversās transkripcijas polimerāzes ķēdes reakcija (RT-PCR) ir viens no daudzajiem polimerāzes ķēdes reakcijas jeb PCR variantiem. Šo laboratorijas paņēmienu plaši izmanto molekulārajā bioloģijā, lai zinātnieki varētu izgatavot vairākas noteiktas DNS sekvences kopijas, izmantojot procesu, ko sauc par “amplifikāciju”. Atšķirība starp RT-PCR un tradicionālo PCR ir tāda, ka RNS vispirms tiek transkriptēta savā DNS komplementā, kas izmanto reverso transkriptāzi. Jaunā komplementārā DNS, kas satur apgriezto transkripciju, tiks pastiprināta, izmantojot tradicionālo PCR vai reālā laika PCR.

Lielākā daļa studentu, kas pēta šo procesu, bieži pieļauj kļūdu, mainot reversās transkripcijas PCR un reālā laika PCR, jo abi šie vārdi ir saīsināti. Lai izvairītos no neskaidrībām, biologi reālā laika PCR apzīmē kā kvantitatīvu reālā laika PCR vai qPCR.

QPCR ievērojami atšķiras no RT-PCR, jo qPCR ir atbildīgs par amplifikācijas mērīšanu, kad tā notiek. Var teikt, ka RT-PCR sāk pastiprināšanas procesu, bet qPCR to mēra, kamēr notiek procedūra.

Kvantitatīva reālā laika PCR

QPCR faktiski ir mainījis tradicionālo vienvirziena pieejas metodi, kad nepieciešams kvantitatīvi noteikt DNS un RNS, jo, izmantojot qPCR metodi, biologiem ir iespējams noteikt sākotnējo nukleīnskābes koncentrāciju pat pirms tiek novēroti reakcijas rezultāti un pierakstīts.

QPCR, ko mūsdienās uzskata par visspēcīgāko un jutīgāko analīzes paņēmienu ģenētiskajiem pētījumiem, pielietojums ir ievērojami paplašinājies. Pašlaik tas ir iesaistīts kvantitatīvā gēnu ekspresijas analīzē, genotipēšanā, patogēnu noteikšanā un SNP analīzē, kā arī RNS iejaukšanās mērījumos.

QPCR bieži apvieno ar reversās transkripcijas procesu, lai kvantitatīvi noteiktu kurjeru RNS un MicroRNS, kas atrodas audu šūnās, kuras novēro un ar kurām eksperimentē. Pēc tam rodas vēl viena redzama atšķirība starp abām: RT-PCR var izmantot pastiprināšanas procesā, taču kvantitatīvās noteikšanas nolūkā tas ir jāsakausē ar qPCR..

QPCR ir arī zināms, ka tas ir kvantitatīvāks, jo datus var savākt, progresējot PCR eksponenciālā augšanas (log) fāzei. Biologi atzīmē, ka PCR blakusprodukta daudzums ir tieši proporcionāls šablona nukleīnskābes daudzumam, kas tiks mērīts caur qPCR.

No otras puses, RT-PCR nebūt nav kvantitatīva rakstura, jo pastiprinātas joslas intensitātes ievērošana uz gela, ievērojot noteikto koncentrācijas standartu, var radīt “daļēji kvantitatīvu” secinājumu.

Kopsavilkums:

1.QPCR un RT-PCR ir abi termini, ko izmanto biotehnoloģijā un ko izmanto vairāku DNS kopiju ražošanai.
2.RT-PCR izmanto, lai pastiprinātu DNS koda apgriezto transkripciju; QPCR mēra pastiprinājumu.
3.RT-PCR ir paredzēts amplifikācijai, savukārt qPCR - kvantitatīvai noteikšanai.
4.QPCR ir kvantitatīvs raksturs, savukārt RT-PCR nav.