Atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu

Galvenā atšķirība - nitroceluloze vs neilona membrāna
 

Blotēšana ir svarīgs paņēmiens, kā molekulārajā bioloģijā noteikt specifiskas DNS, RNS un olbaltumvielas no to maisījumiem. To veic, izmantojot membrānu, ko sauc par blotu. Ir dažādas blotēšanas metodes, piemēram, ziemeļu, dienvidu un rietumu blotēšana. Botēšanas procesam jāizvēlas piemērota membrāna, lai novērstu nespecifisku saistīšanos un nepareizu noteikšanu. Blotēšanas metodēs membrānas parasti izmanto nitroceluloze, neilons un PVDF. Viņiem ir atšķirīgas īpašības. Galvenā atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu ir tā nitrocelulozes membrānām ir augsts olbaltumvielu imobilizācijas potenciāls tā kā neilona membrānām ir augsts nukleīnskābju imobilizācijas potenciāls. Tomēr blotēšanas metodēs bieži izmanto abu veidu membrānas.

SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir nitrocelulozes membrāna
3. Kas ir neilona membrāna
4. Blakus salīdzinājums - nitroceluloze un neilona membrāna
5. Kopsavilkums

Kas ir nitrocelulozes membrāna?

Nitrocelulozes membrāna ir nukleīnskābju un olbaltumvielu blotēšanas metodēs parasti izmantots membrānas filtrs. Tam ir augsts olbaltumvielu saistīšanās potenciāls. Tādējādi rietumu blotēšanas tehnikā plaši izmanto nitrocelulozes membrānas. Nitrocelulozes membrānas ir savietojamas ar visām hibridizācijas metodēm, un tām ir lieliska saistīšanās spēja bez traucējumiem. Nitrocelulozes membrānas dabiski ir hidrofīlas. Tie veido hidrofilu mijiedarbību ar molekulām un efektīvi imobilizē tās uz membrānas. Komerciālās nitrocelulozes membrānas ir pieejamas divos poru izmēros: 0,45 un 0,2 μm.

01. attēls. Rietumu blotēšanā izmantotā nitrocelulozes membrāna

Kas ir neilona membrāna?

Neilona membrāna ir vēl viens komerciālas membrānas tips, ko izmanto blotēšanas metodēs. Alternatīvi to izmanto ar nitrocelulozes membrānām dienvidu un ziemeļu blotēšanai. Neilona membrānas ir ideāli piemērotas dienvidu blotēšanai nekā nitroceluloze, ņemot vērā to augsto afinitāti saistībai ar DNS. Sakarā ar vairākām neilona membrānu unikālajām īpašībām, pētnieki parasti izmanto neilona membrānas dienvidu un ziemeļu blotēšanai, nevis virs nitrocelulozes membrānas. Neilona membrānas, atšķirībā no nitrocelulozes, ir arī ieteicamas strēmeļu noņemšanai un pārveidošanai.

02. Attēls. Dienvidu blotēšanai izmantotā neilona membrāna

Kāda ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu?

Nitroceluloze vs neilona membrāna
Nitrocelulozes membrānas ir trauslas.	Neilona membrānas ir mazāk trauslas.
Pārkraušana
Ar tiem ir grūti rīkoties.	Tie ir viegli apstrādājami.
Pārrakstīšana
Neatbalstītas nitrocelulozes membrānas ir grūti pārveidot.	Ar neilona membrānām ir viegli atkārtot.
Savietojamība ar dažādiem uzglabāšanas apstākļiem
Nitrocelulozes membrānām ir mazāka izturība, lai izturētu dažādus glabāšanas apstākļus.	Neilona membrānas spēcīgāk reaģē uz dažādiem uzglabāšanas apstākļiem.
Izmantojiet
Nepieciešama iepriekšēja mitrināšana.	Priekšsildīšana nav nepieciešama neilona membrānām.
Hidrofilā daba
Nitrocelulozes membrānām ir hidrofils raksturs, bet tās ir mazāk hidrofīlas nekā neilona membrānas.	Viņiem ir izteikti hidrofils raksturs.
Imobilizācijas potenciāls
Nitrocelulozes membrānām ir mazāka afinitāte pret nukleīnskābēm. Bet tai ir augsta afinitāte pret olbaltumvielām.	Neilona membrānām ir augsts saistīšanās potenciāls ar nukleīnskābēm nekā nitrocelulozes membrānām.

Kopsavilkums - nitroceluloze vs neilona membrāna

Nitrocelulozes un neilona membrānas ir īpašas loksnes, ko izmanto blotēšanas tehnikā, lai reproducētu joslas rakstu uz gēla. Tie dod iespēju noteikt noteiktu secību vai olbaltumvielu no maisījumiem, imobilizējot tos uz membrānas. Kad molekulas ir imobilizētas uz membrānas, to var izmantot kā substrātu hibridizācijas analīzei ar marķētām zondēm. Nitrocelulozes membrānu parasti izmanto olbaltumvielu noteikšanai rietumu blotēšanas metodē, pateicoties tā augstajai saistīšanās afinitātei ar olbaltumvielām. Dienvidu un ziemeļu blotēšanai bieži izmanto neilona membrānas. Šī ir atšķirība starp nitrocelulozi un neilona membrānu.

Atsauces:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf un J. D. Hayes. "Blotēšanas paņēmieni DNS, RNS un olbaltumvielu izpētei." BMJ: Lielbritānijas medicīnas žurnāls. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 1989. gada 14. oktobris. Web. 2017. gada 7. aprīlis
2. Mahmood, Tahrin un Ping-Chang Yang. “Western Blot: tehnika, teorija un problēmu novēršana.” Ziemeļamerikas medicīnas zinātņu žurnāls. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, 2012. gada septembris. Tīmeklis. 2017. gada 7. aprīlis

Attēla pieklājība:
1. “Western blot transfer” Autors Bensaccount angļu Vikipēdijā (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia