Atšķirība starp nitrocelulozi un PVDF

Galvenā atšķirība - nitroceluloze vs PVDF
 

Western blotēšana ir metode, kas ļauj noteikt un kvantitatīvi noteikt proteīnus no olbaltumvielu parauga. Metodes uzticamība ir atkarīga no pareizas membrānas izvēles olbaltumvielu absorbcijai no gēla. Ir dažādi mikroporu membrānu veidi. Nitrocelulozes un PVDF membrānas ir divas šādas membrānas, kuras pētnieki dod priekšroku to īpašo īpašību dēļ, salīdzinot ar cita veida membrānām. Atlase starp nitrocelulozi vai PVDF ir arī vēl viens izaicinājums rietumu blotēšanā. Gan nitrocelulozei, gan PVDF ir augsta olbaltumvielu absorbcijas spēja. Galvenā atšķirība starp nitrocelulozi un PVDF membrānu ir tā nitrocelulozes membrānām nav iespējas noņemt antivielas un membrānas atkārtota izmantošana antivielu atkārtošanai, savukārt PVDF membrānām ir sloksņošanas un atkārtotas izmantošanas spēja.

SATURS
1. Pārskats un galvenās atšķirības
2. Kas ir nitroceluloze
3. Kas ir PVDF
4. Salīdzinājums blakus - nitroceluloze un PVDF
5. Kopsavilkums

Kas ir nitroceluloze?

Nitroceluloze ir polimērs, ko ražo, apstrādājot celulozi ar slāpekļskābi, un to izmanto mikroporu membrānu veidošanai molekulārajā bioloģijā, īpaši blotēšanas metodēm, piemēram, dienvidu, ziemeļu un rietumu blotēšanai. Pora nitrocelulozes membrānu izmēri ir no 3 līdz 20 μm. Nitrocelulozes mikroporas membrānas atvieglo imūnķīmisko reakciju noteikšanu, kas notiek uz membrānas virsmas. Tāpēc nitrocelulozes membrānas bieži izmanto olbaltumvielu imobilizēšanai un specifisku olbaltumvielu noteikšanai rietumu blotēšanā. Nitrocelulozes membrānas var arī imobilizēt glikoproteīnus un nukleīnskābes.

Vairāku pazīmju dēļ sānu plūsmas pārbaudēs priekšroka tiek dota nitrocelulozes membrānām. Nitrocelulozes membrānas absorbē olbaltumvielas augstā koncentrācijā. Membrānas samitrināšanai izmantotais šķīdinātājs nemazina nitrocelulozes membrānas olbaltumvielu absorbciju. Nitrocelulozes membrānas var viegli sagriezt vēlamajā gela lielumā un ar elektrisko vai kapilāro pārvietošanu pārnest olbaltumvielas no gela uz membrānu. Nitroceluloze ļauj ātrāk pārplūst proteīniem caur membrānu ar augstu saistīšanās potenciālu. Nitroceluloze parāda uzlabotu izturību. Vēl viena īpaša nitrocelulozes membrānas īpašība ir tā, ka to var viegli pielīmēt ar ūdensnecaurlaidīgām līmēm, kas nav šķīdinātāji, uz dažādām plastmasas pamatnēm.

01. attēls. Nitrocelulozes membrāna rietumu blotēšanai

Kas ir PVDF?

Polivinilidēna difluorīds (PVDF) ir fluorpolimērs, ko iegūst vinilidēna difluorīda polimerizācijas rezultātā, un tam ir augsta olbaltumvielu imobilizācijas spēja. Tāpēc rietumu blotēšanas tehnikā tiek izmantotas mikroporas membrānas, kas izgatavotas no PVDF, lai analizētu specifiskus proteīnus no olbaltumvielu maisījumiem. PVDF membrānas var izmantot arī aminoskābju analīzei un olbaltumvielu secībai. Vissvarīgākā PVDF membrānas īpašība virs nitrocelulozes membrānas ir tā, ka to var viegli noņemt antivielas un atkārtoti izmantot nākamajām antivielu zondēm.

PVDF membrānas ir biezākas nekā nitrocelulozes membrānas; līdz ar to ir izturīgāki pret bojājumiem atkārtotas izmantošanas laikā. PVDF membrānas ir ļoti hidrofobas. Tāpēc pirms lietošanas tie ir jāizmērcē metanolā vai izopropanolā.

Kāda ir atšķirība starp nitrocelulozi un PVDF?

Nitroceluloze vs PVDF
Nitroceluloze ir polimērs, kas sastāv no celulozes.	PVDF ir fluorpolimērs, ko iegūst vinilidēna difluorīda polimerizācijas rezultātā.
Membrānas poras izmērs
Tipiski poru izmēri ir 0,1, 0,2 vai 0,45 μ	Tipiski poru izmēri ir 0,1, 0,2 vai 0,45 mikroni
Olbaltumvielu saistīšanas spēja
Nitrocelulozes olbaltumvielu saistīšanās spēja ir no 80 līdz 100 μg / cm2.	PVDF olbaltumvielu saistīšanās spēja ir no 170 līdz 200 μg / cm2.
Jutīgums
Tam ir zema jutība, salīdzinot ar PVDF.	Tam ir augsta jutība.
Vāji izteiktu olbaltumvielu noteikšana
Tā kā jutība nitrocelulozes membrānās ir zema, tā nav piemērota vāji izteiktu olbaltumvielu noteikšanai.	Tas ir vairāk piemērots zemu ekspresijas olbaltumvielu noteikšanai, pateicoties tā augstajai jutībai.
Fona troksnis
Tam ir zemāks fona troksnis	Tam ir lielāks fona troksnis.
Mijiedarbība ar olbaltumvielām
Olbaltumvielu molekulas ar hidrofobu mijiedarbību saistās ar nitrocelulozes membrānām.	Olbaltumvielas saistās ar PVDF membrānām hidrofobu un dipolu mijiedarbības rezultātā.
Membrānas raksturs
Nitroceluloze ir trausla un trausla. Tomēr ir pieejamas nitrocelulozes versijas, un tās ir izturīgas.	PVDF ir izturīgāks un tam ir augstāka ķīmiskā izturība.
Spēja noģērbt un izmantot atkārtoti
Nitrocelulozei var būt grūtības noņemt un reprobēt, nezaudējot signālu.	PVDF ir ideāli piemērots programmu atkārtošanai un secībai.
Piemērotība
Nitroceluloze ir lieliski piemērota olbaltumvielu ar zemu molekulmasu noteikšanai.	PVDF ir vairāk piemērots olbaltumvielu noteikšanai ar lielāku molekulmasu.
Citi lietojumi
Nitrocelulozi var izmantot nukleīnskābju analīzei un punktu / spraugu blotēšanai.	PVDF var izmantot olbaltumvielu secības noteikšanai un cietās fāzes noteikšanas sistēmām.
Izmaksas
Tas ir lētāk nekā PVDF membrānas.	Tas ir dārgāk nekā nitrocelulozes membrānas.
Nepieciešamība veikt iepriekšēju mitrināšanu
Nitrocelulozes membrānām nav nepieciešama iepriekšēja mērīšana ar metanolu	PVDF membrānām nepieciešama iepriekšēja mērīšana ar metanolu.

Kopsavilkums - nitroceluloze vs PVDF

Nitrocelulozes membrānas bija pirmās membrānas, ko komerciāli izmanto sānu plūsmas pārbaudē. Viņiem ir augsta spēja absorbēt olbaltumvielas. Tāpēc rietumu blotēšanā tiek izmantotas nitrocelulozes membrānas. PVDF ir vēl viens membrānas tips, ko izmanto rietumu blotēšanā, un tam ir arī augsta olbaltumvielu absorbcijas spēja. Abus tipus izmanto rietumu blotēšanā olbaltumvielu analīzei. Tomēr PVDF membrānām ir vairāk īpašu atribūtu, padarot tās rietumu blotēšanai piemērotākas nekā nitrocelulozes membrānas. Bet nitrocelulozes membrānas ir vairāk piemērotas zemu molekulāro svērto olbaltumvielu noteikšanai, PVDF membrānas ir piemērotākas lielmolekulāro olbaltumvielu noteikšanai. Šī ir atšķirība starp nitrocelulozes un PVDF membrānām.

Attēla pieklājība:
1. “Western blot transfer” Autors Bensaccount angļu Vikipēdijā (CC BY 3.0), izmantojot Commons Wikimedia

Atsauce:
1.Luque-Garsija, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun un Thomas A. Neubert. “Nitrocelulozes membrānu izmantošana olbaltumvielu raksturošanai ar matricas lāzera desorbcijas / jonizācijas masas spektrometriju.” Analītiskā ķīmija. ASV Nacionālā medicīnas bibliotēka, 2006. gada 15. jūlijs. Tīmeklis. 2017. gada 28. marts
2. “Molekulārie marķieri un augu biotehnoloģija.” Google grāmatas. N.p., n.d. Web. 2017. gada 28. marts
3.Mondiena, 2013. gada 8. aprīlis Tweet. “Burvju membrānā: gudri izvēlieties Best Western blot rezultātus.” Biocompare. N.p., 2013. gada 8. aprīlis. Web. 2017. gada 28. marts